中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
2期
294-301
,共8页
苏仲春%陈家劲%王圳%陈志明%王跃春
囌仲春%陳傢勁%王圳%陳誌明%王躍春
소중춘%진가경%왕수%진지명%왕약춘
脐带%间充质干细胞%激素原转化酶%胰岛样细胞团
臍帶%間充質榦細胞%激素原轉化酶%胰島樣細胞糰
제대%간충질간세포%격소원전화매%이도양세포단
目的:通过各种生物化学制剂的不同组合在体外诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向胰岛样细胞团(ILCs)分化,筛选出能表达激素原转化酶(PC)1和PC2的促成熟方案.方法:用胶原酶Ⅱ消化、过滤离心和不完全消化传代的方法从人的完整脐带中分离和纯化hUC-MSCs,流式细胞术、RT-PCR和免疫细胞荧光技术检测其干细胞标志物.选用A、B、C 3种方案诱导hUC-MSCs向ILCs分化:方案A为含10 μg/L 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、10 μg/L 表皮生长因子(EGF)、10 mg/L银杏提取液(GBE)及2%胎牛血清(FCS)的高糖培养基IMDM;在方案A基础上加入10 μg/L尼克酰胺为方案B;在方案B基础上加入10 μg/L肝细胞生长因子(HGF)为方案C.在hUC-MSCs诱导前后,通过倒置显微镜观察其形态变化,采用RT-PCR、qPCR和Western blotting检测胰岛相关mRNA和蛋白,特别是PC1和 PC2的表达情况.结果:(1)细胞形态、表面相关抗原、干细胞特异基因的表达等情况表明hUC-MSCs可以从人脐带中被成功地分离和纯化;hUC-MSCs普遍表达nestin,轻微表达Isl1.(2) RT-PCR检测发现方案A诱导的ILCs有Glut-2和MafA mRNA表达,方案B诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1和PC2 mRNA表达,方案C诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1和胰岛素mRNA表达,提示A、B和C 3种方案诱导的细胞有逐渐成熟的趋势.qPCR检测也证实了PC1 mRNA仅在方案C中有表达,PC2 mRNA在方案B和方案C中均有表达,但方案C中PC2 mRNA的表达量显著高于方案B(P<0.01);Western blotting结果也表明PC1蛋白只在方案C中有表达;PC2酶原(ProPC2)与PC2在方案B和方案C中都有表达,且它们在方案C中的表达量均显著高于方案B(P<0.01).结论:(1)hUC-MSCs具有向胰岛祖细胞或胰岛细胞分化的潜能;(2)方案C中尼克酰胺和HGF可促进hUC-MSCs向ILCs分化,使ILCs表达PC1并上调PC2;相对于方案A和B,方案C是一种促成熟方案.
目的:通過各種生物化學製劑的不同組閤在體外誘導人臍帶間充質榦細胞(hUC-MSCs)嚮胰島樣細胞糰(ILCs)分化,篩選齣能錶達激素原轉化酶(PC)1和PC2的促成熟方案.方法:用膠原酶Ⅱ消化、過濾離心和不完全消化傳代的方法從人的完整臍帶中分離和純化hUC-MSCs,流式細胞術、RT-PCR和免疫細胞熒光技術檢測其榦細胞標誌物.選用A、B、C 3種方案誘導hUC-MSCs嚮ILCs分化:方案A為含10 μg/L 堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、10 μg/L 錶皮生長因子(EGF)、10 mg/L銀杏提取液(GBE)及2%胎牛血清(FCS)的高糖培養基IMDM;在方案A基礎上加入10 μg/L尼剋酰胺為方案B;在方案B基礎上加入10 μg/L肝細胞生長因子(HGF)為方案C.在hUC-MSCs誘導前後,通過倒置顯微鏡觀察其形態變化,採用RT-PCR、qPCR和Western blotting檢測胰島相關mRNA和蛋白,特彆是PC1和 PC2的錶達情況.結果:(1)細胞形態、錶麵相關抗原、榦細胞特異基因的錶達等情況錶明hUC-MSCs可以從人臍帶中被成功地分離和純化;hUC-MSCs普遍錶達nestin,輕微錶達Isl1.(2) RT-PCR檢測髮現方案A誘導的ILCs有Glut-2和MafA mRNA錶達,方案B誘導的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1和PC2 mRNA錶達,方案C誘導的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1和胰島素mRNA錶達,提示A、B和C 3種方案誘導的細胞有逐漸成熟的趨勢.qPCR檢測也證實瞭PC1 mRNA僅在方案C中有錶達,PC2 mRNA在方案B和方案C中均有錶達,但方案C中PC2 mRNA的錶達量顯著高于方案B(P<0.01);Western blotting結果也錶明PC1蛋白隻在方案C中有錶達;PC2酶原(ProPC2)與PC2在方案B和方案C中都有錶達,且它們在方案C中的錶達量均顯著高于方案B(P<0.01).結論:(1)hUC-MSCs具有嚮胰島祖細胞或胰島細胞分化的潛能;(2)方案C中尼剋酰胺和HGF可促進hUC-MSCs嚮ILCs分化,使ILCs錶達PC1併上調PC2;相對于方案A和B,方案C是一種促成熟方案.
목적:통과각충생물화학제제적불동조합재체외유도인제대간충질간세포(hUC-MSCs)향이도양세포단(ILCs)분화,사선출능표체격소원전화매(PC)1화PC2적촉성숙방안.방법:용효원매Ⅱ소화、과려리심화불완전소화전대적방법종인적완정제대중분리화순화hUC-MSCs,류식세포술、RT-PCR화면역세포형광기술검측기간세포표지물.선용A、B、C 3충방안유도hUC-MSCs향ILCs분화:방안A위함10 μg/L 감성성섬유세포생장인자(bFGF)、10 μg/L 표피생장인자(EGF)、10 mg/L은행제취액(GBE)급2%태우혈청(FCS)적고당배양기IMDM;재방안A기출상가입10 μg/L니극선알위방안B;재방안B기출상가입10 μg/L간세포생장인자(HGF)위방안C.재hUC-MSCs유도전후,통과도치현미경관찰기형태변화,채용RT-PCR、qPCR화Western blotting검측이도상관mRNA화단백,특별시PC1화 PC2적표체정황.결과:(1)세포형태、표면상관항원、간세포특이기인적표체등정황표명hUC-MSCs가이종인제대중피성공지분리화순화;hUC-MSCs보편표체nestin,경미표체Isl1.(2) RT-PCR검측발현방안A유도적ILCs유Glut-2화MafA mRNA표체,방안B유도적ILCs유Glut-2、MafA、Nkx6.1화PC2 mRNA표체,방안C유도적ILCs유Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1화이도소mRNA표체,제시A、B화C 3충방안유도적세포유축점성숙적추세.qPCR검측야증실료PC1 mRNA부재방안C중유표체,PC2 mRNA재방안B화방안C중균유표체,단방안C중PC2 mRNA적표체량현저고우방안B(P<0.01);Western blotting결과야표명PC1단백지재방안C중유표체;PC2매원(ProPC2)여PC2재방안B화방안C중도유표체,차타문재방안C중적표체량균현저고우방안B(P<0.01).결론:(1)hUC-MSCs구유향이도조세포혹이도세포분화적잠능;(2)방안C중니극선알화HGF가촉진hUC-MSCs향ILCs분화,사ILCs표체PC1병상조PC2;상대우방안A화B,방안C시일충촉성숙방안.
