CAJ | 학술논문

目的:研究分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因甲基化对耐药白血病细胞多药耐药蛋白1/P-糖蛋白(MDR1/P-gp)表达的调节及其可能的信号通路.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测白血病患者及白血病细胞系中SFRP5基因启动子区甲基化状态.采用Western blotting检测非磷酸化β-catenin(NP-β-catenin)在SFRP5基因甲基化白血病患者及细胞系中表达.使用去甲基化试剂5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶(DAC)恢复SFRP5表达,采用RT-PCR和real-time PCR检测处理前后MDR1 mRNA表达,采用Western blotting检测P-gp表达.结果:5/12例白血病患者标本及4种白血病细胞系存在SFRP5基因完全甲基化.在5例患者标本中,有3例(L2、L7和L8)NP-β-catenin水平高于其它标本,在4种白血病细胞系中,KG1a中NP-β-catenin水平高于另外3个细胞系.存在NP-β-catenin高水平表达的3例患者(L2、L7和L8)中检出MDR1 mRNA及P-gp表达.在4种细胞系中,KG1a存在MDR1 mRNA及P-gp表达.使用去甲基化试剂DAC处理L2、L7、L8患者标本和KG1a细胞,恢复SFRP5表达,L2、L7、L8和KG1a中MDR1 mRNA水平均显著下降(P<0.01),P-gp表达水平亦被下调.结论:SFRP5基因甲基化可导致Wnt/β-catenin信号通路被激活,活化的β-catenin激活下游靶基因MDR1转录,编码的药物外排泵P-gp表达增加,促进白血病多药耐药的形成.
목적:연구분비형권곡상관단백5(SFRP5)기인갑기화대내약백혈병세포다약내약단백1/P-당단백(MDR1/P-gp)표체적조절급기가능적신호통로.방법:채용갑기화특이성PCR(MSP)검측백혈병환자급백혈병세포계중SFRP5기인계동자구갑기화상태.채용Western blotting검측비린산화β-catenin(NP-β-catenin)재SFRP5기인갑기화백혈병환자급세포계중표체.사용거갑기화시제5-담잡-2′-탈양포밀정(DAC)회복SFRP5표체,채용RT-PCR화real-time PCR검측처리전후MDR1 mRNA표체,채용Western blotting검측P-gp표체.결과:5/12례백혈병환자표본급4충백혈병세포계존재SFRP5기인완전갑기화.재5례환자표본중,유3례(L2、L7화L8)NP-β-catenin수평고우기타표본,재4충백혈병세포계중,KG1a중NP-β-catenin수평고우령외3개세포계.존재NP-β-catenin고수평표체적3례환자(L2、L7화L8)중검출MDR1 mRNA급P-gp표체.재4충세포계중,KG1a존재MDR1 mRNA급P-gp표체.사용거갑기화시제DAC처리L2、L7、L8환자표본화KG1a세포,회복SFRP5표체,L2、L7、L8화KG1a중MDR1 mRNA수평균현저하강(P<0.01),P-gp표체수평역피하조.결론:SFRP5기인갑기화가도치Wnt/β-catenin신호통로피격활,활화적β-catenin격활하유파기인MDR1전록,편마적약물외배빙P-gp표체증가,촉진백혈병다약내약적형성.