中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
2期
193-199
,共7页
仝莎%陈曜%赵蕾%黄爱龙%阮雄中%陈压西
仝莎%陳曜%趙蕾%黃愛龍%阮雄中%陳壓西
동사%진요%조뢰%황애룡%원웅중%진압서
HepG2细胞%肿瘤坏死因子%肝X受体α%胆固醇外流
HepG2細胞%腫瘤壞死因子%肝X受體α%膽固醇外流
HepG2세포%종류배사인자%간X수체α%담고순외류
目的:观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝X受体α(LXRα)启动子活性及其下游ATP结合盒转运蛋白(ABCA1和ABCG1)表达的影响,从而探讨TNF-α加速HepG2细胞内胆固醇积聚的分子机制.方法:构建LXRα基因的启动子表达载体,观察炎症因子TNF-α对LXRα启动子活性的影响,进一步将HepG2细胞分为对照组(control)、TNF-α组(20 μg/L)、高脂组(LDL,100 mg/L)及联合处理组(TNF-α 20 μg/L+ LDL 100 mg/L).采用实时定量PCR和Western blotting检测LXRfα、ABCA1和 ABCG1的mRNA及蛋白的表达.[3H]标记胆固醇,液体闪烁计数法检测胆固醇外流量.油红O染色和定量比色法分析细胞内胆固醇的含量.结果:成功构建LXRα启动子的萤火虫萤光素酶报告质粒,证明了该启动子有明显活性,TNF-α能明显抑制LXRα启动子的活性.进一步检测发现,和对照组相比,TNF-α下调了LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA与蛋白表达.高脂组胆固醇外流量增加,而TNF-α组胆固醇外流量明显降低.油红O染色显示,TNF-α使细胞内脂质染色明显增加.结论:TNF-α可通过抑制LXRα启动子活性从而抑制HepG2细胞内胆固醇外流导致肝细胞内脂质异常积聚.
目的:觀察腫瘤壞死因子α(TNF-α)對肝X受體α(LXRα)啟動子活性及其下遊ATP結閤盒轉運蛋白(ABCA1和ABCG1)錶達的影響,從而探討TNF-α加速HepG2細胞內膽固醇積聚的分子機製.方法:構建LXRα基因的啟動子錶達載體,觀察炎癥因子TNF-α對LXRα啟動子活性的影響,進一步將HepG2細胞分為對照組(control)、TNF-α組(20 μg/L)、高脂組(LDL,100 mg/L)及聯閤處理組(TNF-α 20 μg/L+ LDL 100 mg/L).採用實時定量PCR和Western blotting檢測LXRfα、ABCA1和 ABCG1的mRNA及蛋白的錶達.[3H]標記膽固醇,液體閃爍計數法檢測膽固醇外流量.油紅O染色和定量比色法分析細胞內膽固醇的含量.結果:成功構建LXRα啟動子的螢火蟲螢光素酶報告質粒,證明瞭該啟動子有明顯活性,TNF-α能明顯抑製LXRα啟動子的活性.進一步檢測髮現,和對照組相比,TNF-α下調瞭LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA與蛋白錶達.高脂組膽固醇外流量增加,而TNF-α組膽固醇外流量明顯降低.油紅O染色顯示,TNF-α使細胞內脂質染色明顯增加.結論:TNF-α可通過抑製LXRα啟動子活性從而抑製HepG2細胞內膽固醇外流導緻肝細胞內脂質異常積聚.
목적:관찰종류배사인자α(TNF-α)대간X수체α(LXRα)계동자활성급기하유ATP결합합전운단백(ABCA1화ABCG1)표체적영향,종이탐토TNF-α가속HepG2세포내담고순적취적분자궤제.방법:구건LXRα기인적계동자표체재체,관찰염증인자TNF-α대LXRα계동자활성적영향,진일보장HepG2세포분위대조조(control)、TNF-α조(20 μg/L)、고지조(LDL,100 mg/L)급연합처리조(TNF-α 20 μg/L+ LDL 100 mg/L).채용실시정량PCR화Western blotting검측LXRfα、ABCA1화 ABCG1적mRNA급단백적표체.[3H]표기담고순,액체섬삭계수법검측담고순외류량.유홍O염색화정량비색법분석세포내담고순적함량.결과:성공구건LXRα계동자적형화충형광소매보고질립,증명료해계동자유명현활성,TNF-α능명현억제LXRα계동자적활성.진일보검측발현,화대조조상비,TNF-α하조료LXRα、ABCA1화ABCG1 mRNA여단백표체.고지조담고순외류량증가,이TNF-α조담고순외류량명현강저.유홍O염색현시,TNF-α사세포내지질염색명현증가.결론:TNF-α가통과억제LXRα계동자활성종이억제HepG2세포내담고순외류도치간세포내지질이상적취.
