上海医学
上海醫學
상해의학
SHANGHAI MEDICAL JOURNAL
2013年
2期
140-142
,共3页
肌细胞增强因子2%PC12细胞%反转录病毒%稳定转染%神经系统相关疾病
肌細胞增彊因子2%PC12細胞%反轉錄病毒%穩定轉染%神經繫統相關疾病
기세포증강인자2%PC12세포%반전록병독%은정전염%신경계통상관질병
目的 构建表达肌细胞增强因子2(MEF2)A基因的反转录病毒载体,并观察稳定感染嗜铬细胞瘤PC12细胞后MEF2A蛋白的表达情况.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pcDNA3-MEF2A-flag质粒,得到MEF2-flag基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化后获取反转录病毒颗粒.将反转录病毒颗粒感染PC12细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出.采用Western印迹法检测MEF2-flag的表达情况.结果 连接重组后经酶切和测序筛选出pBabe-MEF2A-flag.转染pBabe-MEF2A-flag的PC12的细胞组中MEF2A的含量为2.03±0.06,显著高于空载体对照组的1.00±0.04(P＜0.01).结论 成功构建pBabe-MEF2A-flag反转录病毒载体,并建立了其稳定转染的PC12细胞系.
目的 構建錶達肌細胞增彊因子2(MEF2)A基因的反轉錄病毒載體,併觀察穩定感染嗜鉻細胞瘤PC12細胞後MEF2A蛋白的錶達情況.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切pcDNA3-MEF2A-flag質粒,得到MEF2-flag基因的編碼序列,定嚮插入到pBabe-puro載體中,經擴增、篩選暘性剋隆、酶切和測序驗證後,轉染293T細胞進行病毒包裝、擴增、純化後穫取反轉錄病毒顆粒.將反轉錄病毒顆粒感染PC12細胞,經嘌呤黴素篩選後抗性剋隆集落長齣.採用Western印跡法檢測MEF2-flag的錶達情況.結果 連接重組後經酶切和測序篩選齣pBabe-MEF2A-flag.轉染pBabe-MEF2A-flag的PC12的細胞組中MEF2A的含量為2.03±0.06,顯著高于空載體對照組的1.00±0.04(P＜0.01).結論 成功構建pBabe-MEF2A-flag反轉錄病毒載體,併建立瞭其穩定轉染的PC12細胞繫.
목적 구건표체기세포증강인자2(MEF2)A기인적반전록병독재체,병관찰은정감염기락세포류PC12세포후MEF2A단백적표체정황.방법 용EcoR Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절pcDNA3-MEF2A-flag질립,득도MEF2-flag기인적편마서렬,정향삽입도pBabe-puro재체중,경확증、사선양성극륭、매절화측서험증후,전염293T세포진행병독포장、확증、순화후획취반전록병독과립.장반전록병독과립감염PC12세포,경표령매소사선후항성극륭집락장출.채용Western인적법검측MEF2-flag적표체정황.결과 련접중조후경매절화측서사선출pBabe-MEF2A-flag.전염pBabe-MEF2A-flag적PC12적세포조중MEF2A적함량위2.03±0.06,현저고우공재체대조조적1.00±0.04(P＜0.01).결론 성공구건pBabe-MEF2A-flag반전록병독재체,병건립료기은정전염적PC12세포계.
