云南农业大学学报
雲南農業大學學報
운남농업대학학보
JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
6期
804-809
,共6页
血红素加氧酶2%原核表达%纯化%酶活
血紅素加氧酶2%原覈錶達%純化%酶活
혈홍소가양매2%원핵표체%순화%매활
heme oxygenase 2 (HMOX2)%prokaryotic expression%purification%enzyme activity
血红素加氧酶是广泛存在于哺乳动物细胞中的一类氧化酶,催化血红素氧化生成胆绿素,同时生成三价铁离子和一氧化碳,对调节体内离子平衡,参与机体免疫反应及调节神经系统功能均有重要影响.血红素加氧酶2 (HMOX2)与血红素加氧酶1的功能相似,但分布不同且有着不同的反应动力学,但目前国内外对其研究较少.本文在获得HMOX2全长cDNA的基础上,将其克隆至高表达载体,通过自动诱导系统表达了人血红素加氧酶2重组蛋白(His10-HMOX2).每升菌液通过Ni-NTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,最终约可获得92.6 mg纯度为92％蛋白质样品.通过酶活检测,其活性可达到69.51 u/mg,与已报道的血红素加氧酶活性相比较,我们得到的HMOX2具有与之相当的酶活性.同时,通过改变反应温度(20 ～ 95℃),pH值(pH 6 ～9)等条件,检测了重组His10-HMOX2的催化活性,在温度为40℃和pH为8时,其活性最高.本研究为将来进一步深入了解HMOX2的生化功能及与相关疾病的关系奠定了基础.
血紅素加氧酶是廣汎存在于哺乳動物細胞中的一類氧化酶,催化血紅素氧化生成膽綠素,同時生成三價鐵離子和一氧化碳,對調節體內離子平衡,參與機體免疫反應及調節神經繫統功能均有重要影響.血紅素加氧酶2 (HMOX2)與血紅素加氧酶1的功能相似,但分佈不同且有著不同的反應動力學,但目前國內外對其研究較少.本文在穫得HMOX2全長cDNA的基礎上,將其剋隆至高錶達載體,通過自動誘導繫統錶達瞭人血紅素加氧酶2重組蛋白(His10-HMOX2).每升菌液通過Ni-NTA親和層析和Mono Q陰離子交換層析純化,最終約可穫得92.6 mg純度為92％蛋白質樣品.通過酶活檢測,其活性可達到69.51 u/mg,與已報道的血紅素加氧酶活性相比較,我們得到的HMOX2具有與之相噹的酶活性.同時,通過改變反應溫度(20 ～ 95℃),pH值(pH 6 ～9)等條件,檢測瞭重組His10-HMOX2的催化活性,在溫度為40℃和pH為8時,其活性最高.本研究為將來進一步深入瞭解HMOX2的生化功能及與相關疾病的關繫奠定瞭基礎.
혈홍소가양매시엄범존재우포유동물세포중적일류양화매,최화혈홍소양화생성담록소,동시생성삼개철리자화일양화탄,대조절체내리자평형,삼여궤체면역반응급조절신경계통공능균유중요영향.혈홍소가양매2 (HMOX2)여혈홍소가양매1적공능상사,단분포불동차유착불동적반응동역학,단목전국내외대기연구교소.본문재획득HMOX2전장cDNA적기출상,장기극륭지고표체재체,통과자동유도계통표체료인혈홍소가양매2중조단백(His10-HMOX2).매승균액통과Ni-NTA친화층석화Mono Q음리자교환층석순화,최종약가획득92.6 mg순도위92％단백질양품.통과매활검측,기활성가체도69.51 u/mg,여이보도적혈홍소가양매활성상비교,아문득도적HMOX2구유여지상당적매활성.동시,통과개변반응온도(20 ～ 95℃),pH치(pH 6 ～9)등조건,검측료중조His10-HMOX2적최화활성,재온도위40℃화pH위8시,기활성최고.본연구위장래진일보심입료해HMOX2적생화공능급여상관질병적관계전정료기출.
