CAJ | 학술논문

通过构建2种真核表达载体比较Piwi蛋白在真核细胞中的表达部位,为进一步研究Piwi蛋白的生物学功能提供依据.采用RT-PCR方法克隆了狼山鸡睾丸组织中Piwi基因CDS,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-Piwi,脂质体PEI介导基因转染NIH-3T3细胞,同时构建pcDNA3.1-Piwi真核表达载体,采用细胞间接免疫荧光方法检测Piwi蛋白在NIH-3T3细胞的表达部位.结果表明,成功克隆出公鸡Piwi基因的全序列CDS,大小为2604 bp,与GenBank中预计的序列基本一致；融合表达载体pEGFP-C1-Piwi在整个细胞中都有表达；而间接免疫荧光方法检测到pcDNA3.1-Piwi载体主要在NIH-3T3细胞质中表达.Piwi蛋白主要在细胞质中表达,采用间接免疫荧光方法比EGFP报告基因法更为可靠,适合目的蛋白的亚细胞定位研究.
통과구건2충진핵표체재체비교Piwi단백재진핵세포중적표체부위,위진일보연구Piwi단백적생물학공능제공의거.채용RT-PCR방법극륭료랑산계고환조직중Piwi기인CDS,구건함유증강형록색형광단백(EGFP)보고기인적융합표체재체pEGFP-C1-Piwi,지질체PEI개도기인전염NIH-3T3세포,동시구건pcDNA3.1-Piwi진핵표체재체,채용세포간접면역형광방법검측Piwi단백재NIH-3T3세포적표체부위.결과표명,성공극륭출공계Piwi기인적전서렬CDS,대소위2604 bp,여GenBank중예계적서렬기본일치；융합표체재체pEGFP-C1-Piwi재정개세포중도유표체；이간접면역형광방법검측도pcDNA3.1-Piwi재체주요재NIH-3T3세포질중표체.Piwi단백주요재세포질중표체,채용간접면역형광방법비EGFP보고기인법경위가고,괄합목적단백적아세포정위연구.