CAJ | 학술논문

拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果.克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA；分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性.用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达.随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果.结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH 3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达.联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72 h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48 h内亦未受到NDV的侵染；与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P＜0.05).构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因.
의구건신경안산매(NA)기인화항점액병독(Mx)기인쌍기인진핵공표체재체,병검측기인표체이급전염계성섬유(CEF)세포후적항병독효과.극륭료NA기인화돌변형Mx기인적cDNA；분별정향삽입진핵세포쌍순반자재체pVITRO2중,매절화측서감정쌍기인공표체재체pVITRO2-Mx-NA적정학성.용pVITRO2-Mx-NA전염NIH-3T3세포,통과RT-PCR화간접면역형광(IFA)방법검측목적기인적표체.수후용pVITRO2-Mx-NA전염CEF세포,이용RT-PCR급미량세포병변억제법측정중조단백항신성역병독(NDV)적효과.결과:매절화측서분석표명성공구건료쌍기인진핵공표체재체pVITRO2-Mx-NA,재전염후적NIH 3T3화CEF세포중동시검측도료NA화Mx기인적표체.연합기인표체적중조단백가보호CEF세포재부육적72 h내면수NDV적감염,이전염료돌변형Mx혹자NA단기인진핵표체재체적CEF세포재부육적48 h내역미수도NDV적침염；여단기인전염조상비,연합기인전염조명현연지NDV감염CEF세포적시간,차이현저(P＜0.05).구건적쌍기인진핵표체재체pVITRO2-Mx-NA전염CEF세포후,기표체적중조단백Mx-NA재세포수평상구유협동연완NDV감염적능력,차우우단개기인.