南方水产科学
南方水產科學
남방수산과학
SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE
2013年
1期
28-34
,共7页
马庆男%董在杰%朱文彬%苏胜彦%张宁%袁新华%杨弘
馬慶男%董在傑%硃文彬%囌勝彥%張寧%袁新華%楊弘
마경남%동재걸%주문빈%소성언%장저%원신화%양홍
罗非鱼%TRAP%正交设计%单因素试验%优化
囉非魚%TRAP%正交設計%單因素試驗%優化
라비어%TRAP%정교설계%단인소시험%우화
靶位区域扩增多态性(target region amplification polymorphism,TRAP)是一种新型功能性分子标记,比较了L16 (45)正交试验和单因素方法优化罗非鱼(Oreochromis spp.)TRAP反应体系.2种分析方法结果中dNTPs浓度、随机引物浓度、DNA浓度相同而镁离子(Mg2+)浓度和TaqDNA聚合酶浓度不同,不同因素间存在一定的交互作用.正交设计方法比单因素法更简单、科学、合理.该试验获得罗非鱼15 μL TRAP最优反应体系为DNA模板浓度为60 ng、Mg2+浓度为1.5 mmol·L-1、dNTPs浓度为0.3 mmol·L-1、TaqDNA聚合酶0.5U、随机引物浓度为7 pmol·L-1和固定引物浓度为10 pmol·L-1.该反应体系在4个罗非鱼群体中验证,表现出良好的稳定性和重复性,该反应体系的建立为TRAP标记应用于罗非鱼遗传多样性评价、种质鉴定、分子标记辅助育种等研究提供了新的手段.
靶位區域擴增多態性(target region amplification polymorphism,TRAP)是一種新型功能性分子標記,比較瞭L16 (45)正交試驗和單因素方法優化囉非魚(Oreochromis spp.)TRAP反應體繫.2種分析方法結果中dNTPs濃度、隨機引物濃度、DNA濃度相同而鎂離子(Mg2+)濃度和TaqDNA聚閤酶濃度不同,不同因素間存在一定的交互作用.正交設計方法比單因素法更簡單、科學、閤理.該試驗穫得囉非魚15 μL TRAP最優反應體繫為DNA模闆濃度為60 ng、Mg2+濃度為1.5 mmol·L-1、dNTPs濃度為0.3 mmol·L-1、TaqDNA聚閤酶0.5U、隨機引物濃度為7 pmol·L-1和固定引物濃度為10 pmol·L-1.該反應體繫在4箇囉非魚群體中驗證,錶現齣良好的穩定性和重複性,該反應體繫的建立為TRAP標記應用于囉非魚遺傳多樣性評價、種質鑒定、分子標記輔助育種等研究提供瞭新的手段.
파위구역확증다태성(target region amplification polymorphism,TRAP)시일충신형공능성분자표기,비교료L16 (45)정교시험화단인소방법우화라비어(Oreochromis spp.)TRAP반응체계.2충분석방법결과중dNTPs농도、수궤인물농도、DNA농도상동이미리자(Mg2+)농도화TaqDNA취합매농도불동,불동인소간존재일정적교호작용.정교설계방법비단인소법경간단、과학、합리.해시험획득라비어15 μL TRAP최우반응체계위DNA모판농도위60 ng、Mg2+농도위1.5 mmol·L-1、dNTPs농도위0.3 mmol·L-1、TaqDNA취합매0.5U、수궤인물농도위7 pmol·L-1화고정인물농도위10 pmol·L-1.해반응체계재4개라비어군체중험증,표현출량호적은정성화중복성,해반응체계적건립위TRAP표기응용우라비어유전다양성평개、충질감정、분자표기보조육충등연구제공료신적수단.
