心肺血管病杂志
心肺血管病雜誌
심폐혈관병잡지
JOURNAL OF CARDIOVASCULAR AND PULMONARY DISEASES
2013年
3期
351-356
,共6页
周晨阳%陈忠%辛毅%杨燎%王盛%唐小斌%成伟%刘丹
週晨暘%陳忠%辛毅%楊燎%王盛%唐小斌%成偉%劉丹
주신양%진충%신의%양료%왕성%당소빈%성위%류단
内皮祖细胞%外周血%骨髓%体外培养%细胞鉴定%兔
內皮祖細胞%外週血%骨髓%體外培養%細胞鑒定%兔
내피조세포%외주혈%골수%체외배양%세포감정%토
目的:探索并建立兔内皮祖细胞(EPCs)的体外培养、鉴定方法.方法:采用密度梯度分离法分别从兔外周血和骨髓中分离出单个核细胞,接种于预包被明胶的培养瓶,并应用培养基(EBM-2)诱导培养,诱导分化为EPCs；在倒置显微镜下观察两种源性细胞生长过程；台盼蓝法测定细胞传代成活率；通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测比较两种源性获得的EPCs增殖情况；采用免疫荧光染色观察EPCs相关抗原CD34、CD31、CD133及vWF因子的表达.结果:两种源性EPCs均于培养3～4d完全贴壁,呈克隆样生长,7 ～9d形成类似成熟血管内皮细胞形态,细胞数量逐渐增多,细胞成活率均为95％.两种源性获得的第2代细胞生长曲线近似“s”形、MTT法显示3～5d细胞增殖较明显,外周血源性EPCs G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为96.48％和3.52％,骨髓源性EPCsG0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为97.11％和1.84％.第2代EPCs进行免疫荧光鉴定结果显示:两种源性内皮祖细胞均阳性表达CD34、CD133、vWF因子,CD31弱阳性表达.结论:两种源性的EPCs均可高效获得且在体外稳定培养.与传统的骨髓源性EPCs相比较,从外周血源获得的EPCs是一种可靠、简便的培养方法,为组织工程学提供理想的细胞来源.
目的:探索併建立兔內皮祖細胞(EPCs)的體外培養、鑒定方法.方法:採用密度梯度分離法分彆從兔外週血和骨髓中分離齣單箇覈細胞,接種于預包被明膠的培養瓶,併應用培養基(EBM-2)誘導培養,誘導分化為EPCs；在倒置顯微鏡下觀察兩種源性細胞生長過程；檯盼藍法測定細胞傳代成活率；通過繪製生長麯線法、MTT法、DNA週期檢測比較兩種源性穫得的EPCs增殖情況；採用免疫熒光染色觀察EPCs相關抗原CD34、CD31、CD133及vWF因子的錶達.結果:兩種源性EPCs均于培養3～4d完全貼壁,呈剋隆樣生長,7 ～9d形成類似成熟血管內皮細胞形態,細胞數量逐漸增多,細胞成活率均為95％.兩種源性穫得的第2代細胞生長麯線近似“s”形、MTT法顯示3～5d細胞增殖較明顯,外週血源性EPCs G0-G1期和S+G2+M期所佔比例分彆為96.48％和3.52％,骨髓源性EPCsG0-G1期和S+G2+M期所佔比例分彆為97.11％和1.84％.第2代EPCs進行免疫熒光鑒定結果顯示:兩種源性內皮祖細胞均暘性錶達CD34、CD133、vWF因子,CD31弱暘性錶達.結論:兩種源性的EPCs均可高效穫得且在體外穩定培養.與傳統的骨髓源性EPCs相比較,從外週血源穫得的EPCs是一種可靠、簡便的培養方法,為組織工程學提供理想的細胞來源.
목적:탐색병건립토내피조세포(EPCs)적체외배양、감정방법.방법:채용밀도제도분리법분별종토외주혈화골수중분리출단개핵세포,접충우예포피명효적배양병,병응용배양기(EBM-2)유도배양,유도분화위EPCs；재도치현미경하관찰량충원성세포생장과정；태반람법측정세포전대성활솔；통과회제생장곡선법、MTT법、DNA주기검측비교량충원성획득적EPCs증식정황；채용면역형광염색관찰EPCs상관항원CD34、CD31、CD133급vWF인자적표체.결과:량충원성EPCs균우배양3～4d완전첩벽,정극륭양생장,7 ～9d형성유사성숙혈관내피세포형태,세포수량축점증다,세포성활솔균위95％.량충원성획득적제2대세포생장곡선근사“s”형、MTT법현시3～5d세포증식교명현,외주혈원성EPCs G0-G1기화S+G2+M기소점비례분별위96.48％화3.52％,골수원성EPCsG0-G1기화S+G2+M기소점비례분별위97.11％화1.84％.제2대EPCs진행면역형광감정결과현시:량충원성내피조세포균양성표체CD34、CD133、vWF인자,CD31약양성표체.결론:량충원성적EPCs균가고효획득차재체외은정배양.여전통적골수원성EPCs상비교,종외주혈원획득적EPCs시일충가고、간편적배양방법,위조직공정학제공이상적세포래원.
