西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2013年
4期
672-677
,共6页
李玉萍%邓丹丹%张海纳%李学俊%陈鹏
李玉萍%鄧丹丹%張海納%李學俊%陳鵬
리옥평%산단단%장해납%리학준%진붕
苦荞%黄酮-3-羟化酶%原核表达%多克隆抗体
苦蕎%黃酮-3-羥化酶%原覈錶達%多剋隆抗體
고교%황동-3-간화매%원핵표체%다극륭항체
为了制备苦荞黄酮-3-羟化酶的多克隆抗体,该研究以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞黄酮3-羟化酶基因截短体(truncated Fla vanone-3-h ydrox ylase,TrF3H)序列为基础,采用PCR扩增F3H的截短序列编码区(TrF3H),构建了原核表达载体pET47b-TrF3H,并转化入大肠杆菌Rosetta(DE3) plysS中进行诱导表达,将经钴离子螯合层析柱纯化后的目的蛋白切胶回收后制备了高效价的多克隆抗体.结果表明:pET47b-TrF3H在大肠杆菌Rosetta(DE3) plysS中以包涵体的形式高效表达.蛋白质印迹显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的黄酮-3-羟化酶蛋白在苦荞的未成熟种子中大量表达.原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步探讨F3H在苦养中功能奠定了基础.
為瞭製備苦蕎黃酮-3-羥化酶的多剋隆抗體,該研究以苦蕎種子灌漿期cDNA文庫中穫得的苦蕎黃酮3-羥化酶基因截短體(truncated Fla vanone-3-h ydrox ylase,TrF3H)序列為基礎,採用PCR擴增F3H的截短序列編碼區(TrF3H),構建瞭原覈錶達載體pET47b-TrF3H,併轉化入大腸桿菌Rosetta(DE3) plysS中進行誘導錶達,將經鈷離子螯閤層析柱純化後的目的蛋白切膠迴收後製備瞭高效價的多剋隆抗體.結果錶明:pET47b-TrF3H在大腸桿菌Rosetta(DE3) plysS中以包涵體的形式高效錶達.蛋白質印跡顯示,製備的多剋隆抗體能特異識彆其對應的抗原,天然的黃酮-3-羥化酶蛋白在苦蕎的未成熟種子中大量錶達.原覈錶達體繫的建立和多剋隆抗體的製備為進一步探討F3H在苦養中功能奠定瞭基礎.
위료제비고교황동-3-간화매적다극륭항체,해연구이고교충자관장기cDNA문고중획득적고교황동3-간화매기인절단체(truncated Fla vanone-3-h ydrox ylase,TrF3H)서렬위기출,채용PCR확증F3H적절단서렬편마구(TrF3H),구건료원핵표체재체pET47b-TrF3H,병전화입대장간균Rosetta(DE3) plysS중진행유도표체,장경고리자오합층석주순화후적목적단백절효회수후제비료고효개적다극륭항체.결과표명:pET47b-TrF3H재대장간균Rosetta(DE3) plysS중이포함체적형식고효표체.단백질인적현시,제비적다극륭항체능특이식별기대응적항원,천연적황동-3-간화매단백재고교적미성숙충자중대량표체.원핵표체체계적건립화다극륭항체적제비위진일보탐토F3H재고양중공능전정료기출.
