现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2013年
5期
984-987
,共4页
徐海荣%汪步海%武文娟%戴尔峋%刘丽琴%焦寒凝%张西志
徐海榮%汪步海%武文娟%戴爾峋%劉麗琴%焦寒凝%張西誌
서해영%왕보해%무문연%대이순%류려금%초한응%장서지
抗氧化反应元件%增强绿色荧光蛋白%Ⅱ相酶%基因重组
抗氧化反應元件%增彊綠色熒光蛋白%Ⅱ相酶%基因重組
항양화반응원건%증강록색형광단백%Ⅱ상매%기인중조
目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系.方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并转染入HepG2细胞株,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养.结果:重组载体经酶切和PCR鉴定,发现有TK和ARE-TK基因特异条带.DNA测序发现ARE-TK-EGFP框架正确.转染细胞在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光颗粒,该细胞经不同浓度已知Ⅱ相酶诱导剂tBHQ作用后,与EGFP表达量有剂量效应关系.结论:ARE调控的EGFP在HepG2细胞中成功表达.为进一步高通量筛选Ⅱ相酶诱导剂奠定了基础.
目的:採用增彊綠色熒光蛋白(EGFP)作為報告基因,用HepG2細胞構建可敏感、快速、方便地篩選齣Ⅱ相酶誘導劑的評價體繫.方法:通過分子生物學技術,將TK啟動子剋隆到pEGFP-N1上,再將人工閤成的抗氧化反應元件(ARE)序列插入TK啟動子上遊,併轉染入HepG2細胞株,經G418篩選,挑取單剋隆擴大培養.結果:重組載體經酶切和PCR鑒定,髮現有TK和ARE-TK基因特異條帶.DNA測序髮現ARE-TK-EGFP框架正確.轉染細胞在熒光顯微鏡下可見大量的綠色熒光顆粒,該細胞經不同濃度已知Ⅱ相酶誘導劑tBHQ作用後,與EGFP錶達量有劑量效應關繫.結論:ARE調控的EGFP在HepG2細胞中成功錶達.為進一步高通量篩選Ⅱ相酶誘導劑奠定瞭基礎.
목적:채용증강록색형광단백(EGFP)작위보고기인,용HepG2세포구건가민감、쾌속、방편지사선출Ⅱ상매유도제적평개체계.방법:통과분자생물학기술,장TK계동자극륭도pEGFP-N1상,재장인공합성적항양화반응원건(ARE)서렬삽입TK계동자상유,병전염입HepG2세포주,경G418사선,도취단극륭확대배양.결과:중조재체경매절화PCR감정,발현유TK화ARE-TK기인특이조대.DNA측서발현ARE-TK-EGFP광가정학.전염세포재형광현미경하가견대량적록색형광과립,해세포경불동농도이지Ⅱ상매유도제tBHQ작용후,여EGFP표체량유제량효응관계.결론:ARE조공적EGFP재HepG2세포중성공표체.위진일보고통량사선Ⅱ상매유도제전정료기출.
