现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2013年
5期
980-983
,共4页
尹中波%霍云龙%周婷婷%王春玉%赵越
尹中波%霍雲龍%週婷婷%王春玉%趙越
윤중파%곽운룡%주정정%왕춘옥%조월
RNF8%Western blot%免疫沉淀
RNF8%Western blot%免疫沉澱
RNF8%Western blot%면역침정
目的:构建Flag-RNF8真核表达质粒,证实融合蛋白在前列腺癌细胞内的表达与定位.方法:提取人前列腺癌细胞CWR22RV1总RNA,反转录为cDNA.PCR扩增RNF8全长编码区cDNA序列,亚克隆至含有Flag标签的真核表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到前列腺癌细胞CWR22RV1中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察Flag-RNF8在CWR22RV1细胞内定位.使用免疫沉淀的方法纯化RNF8蛋白.结果:RNF8蛋白全长编码区cDNA克隆到了真核表达载体pcDNA3-Flag中,酶切鉴定片段约为1500bp.Western blot检测到了融合蛋白Flag-RNF8的表达,分子量约为57kDa.Flag-RNF8在CWR22RV1细胞中表达并定位在细胞核中.成功纯化RNF8蛋白.结论:成功构建了FlagRNF8全长编码区cDNA的真核表达质粒；鉴定了Flag-RNF8融合蛋白的表达并纯化RNF8蛋白；在CWR22RV1细胞中,Flag-RNF8蛋白主要定位在细胞核中.为进一步研究RNF8的生物学特性及其功能奠定了基础.
目的:構建Flag-RNF8真覈錶達質粒,證實融閤蛋白在前列腺癌細胞內的錶達與定位.方法:提取人前列腺癌細胞CWR22RV1總RNA,反轉錄為cDNA.PCR擴增RNF8全長編碼區cDNA序列,亞剋隆至含有Flag標籤的真覈錶達載體中.將構建的重組質粒測序併轉染到前列腺癌細胞CWR22RV1中,提取細胞蛋白進行Western blot檢測,同時利用共聚焦激光掃描顯微鏡觀察Flag-RNF8在CWR22RV1細胞內定位.使用免疫沉澱的方法純化RNF8蛋白.結果:RNF8蛋白全長編碼區cDNA剋隆到瞭真覈錶達載體pcDNA3-Flag中,酶切鑒定片段約為1500bp.Western blot檢測到瞭融閤蛋白Flag-RNF8的錶達,分子量約為57kDa.Flag-RNF8在CWR22RV1細胞中錶達併定位在細胞覈中.成功純化RNF8蛋白.結論:成功構建瞭FlagRNF8全長編碼區cDNA的真覈錶達質粒；鑒定瞭Flag-RNF8融閤蛋白的錶達併純化RNF8蛋白；在CWR22RV1細胞中,Flag-RNF8蛋白主要定位在細胞覈中.為進一步研究RNF8的生物學特性及其功能奠定瞭基礎.
목적:구건Flag-RNF8진핵표체질립,증실융합단백재전렬선암세포내적표체여정위.방법:제취인전렬선암세포CWR22RV1총RNA,반전록위cDNA.PCR확증RNF8전장편마구cDNA서렬,아극륭지함유Flag표첨적진핵표체재체중.장구건적중조질립측서병전염도전렬선암세포CWR22RV1중,제취세포단백진행Western blot검측,동시이용공취초격광소묘현미경관찰Flag-RNF8재CWR22RV1세포내정위.사용면역침정적방법순화RNF8단백.결과:RNF8단백전장편마구cDNA극륭도료진핵표체재체pcDNA3-Flag중,매절감정편단약위1500bp.Western blot검측도료융합단백Flag-RNF8적표체,분자량약위57kDa.Flag-RNF8재CWR22RV1세포중표체병정위재세포핵중.성공순화RNF8단백.결론:성공구건료FlagRNF8전장편마구cDNA적진핵표체질립；감정료Flag-RNF8융합단백적표체병순화RNF8단백；재CWR22RV1세포중,Flag-RNF8단백주요정위재세포핵중.위진일보연구RNF8적생물학특성급기공능전정료기출.
