CAJ | 학술논문

为了获得兔抗鸡碱性氨基酸转运载体b0,+AT多克隆抗体,并对多克隆抗体进行特异性分析,本试验利用鸡b0,+ AT cDNA全序列(GenBank登录号HQ338713)进行生物信息学分析,预测其蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构及抗原表位,并设计出1段抗原多肽；构建鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒,原核表达融合蛋白经纯化后,注射于新西兰大白兔,经3次加强免疫后,制备兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,并采用酶联免疫分析(ELISA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术分析其效价和特异性.结果如下:1)鸡肠道b0,+AT分子质量为53.8 ku,等电点为8.27,编码493个氨基酸,其中含33个强碱性氨基酸残基(K、R)、28个强酸性氨基酸残基(D、E)、235个疏水性氨基酸残基(A、I、L、F、W、V)、122个极性氨基酸残基(N、C、Q、S、T、Y)；经推测,b0,+AT有12个跨膜螺旋结构,由32.05％α-螺旋、25.96％延伸链和41.99％无规则卷曲组成.2)成功构建了鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒并获得兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,抗体效价可达到1∶204 800,且特异性较好.3)利用制备的兔抗鸡b 0,+AT多克隆抗体作为一抗,肠道组织膜蛋白为抗原,采用Western blot验证获得预期的特异性条带,一抗稀释比例为1∶4 000.结果提示,本试验成功制备了与膜蛋白b0,+AT特异性较好的多克隆抗体,同时其在鸡肠道组织中具有较好的应用效果.
위료획득토항계감성안기산전운재체b0,+AT다극륭항체,병대다극륭항체진행특이성분석,본시험이용계b0,+ AT cDNA전서렬(GenBank등록호HQ338713)진행생물신식학분석,예측기단백질이화성질、과막구역、이급결구급항원표위,병설계출1단항원다태；구건계pET-32a(+)-b0,+AT질립,원핵표체융합단백경순화후,주사우신서란대백토,경3차가강면역후,제비토항계b0,+AT다극륭항체,병채용매련면역분석(ELISA)화단백질면역인적(Western blot)기술분석기효개화특이성.결과여하:1)계장도b0,+AT분자질량위53.8 ku,등전점위8.27,편마493개안기산,기중함33개강감성안기산잔기(K、R)、28개강산성안기산잔기(D、E)、235개소수성안기산잔기(A、I、L、F、W、V)、122개겁성안기산잔기(N、C、Q、S、T、Y)；경추측,b0,+AT유12개과막라선결구,유32.05％α-라선、25.96％연신련화41.99％무규칙권곡조성.2)성공구건료계pET-32a(+)-b0,+AT질립병획득토항계b0,+AT다극륭항체,항체효개가체도1∶204 800,차특이성교호.3)이용제비적토항계b 0,+AT다극륭항체작위일항,장도조직막단백위항원,채용Western blot험증획득예기적특이성조대,일항희석비례위1∶4 000.결과제시,본시험성공제비료여막단백b0,+AT특이성교호적다극륭항체,동시기재계장도조직중구유교호적응용효과.