分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2012年
12期
1845-1851
,共7页
卢明倩%董蓉%温顺华%张韦%王巧贞%黄庶识%陈丽梅
盧明倩%董蓉%溫順華%張韋%王巧貞%黃庶識%陳麗梅
로명천%동용%온순화%장위%왕교정%황서식%진려매
大肠杆菌%甲酸脱氢酶%重组蛋白表达%单细胞%拉曼光谱
大腸桿菌%甲痠脫氫酶%重組蛋白錶達%單細胞%拉曼光譜
대장간균%갑산탈경매%중조단백표체%단세포%랍만광보
甲酸脱氢酶(FDH,EC1.2.1.2)在工业生产中有重要的应用价值,工业上应用的FDH可以通过构建高水平表达重组FDH蛋白的基因工程菌生产,用分子生物学的方法检测重组蛋白的高效表达和积累操作繁杂,耗时耗力且需要破碎细胞.为了寻找一种简单快速,不需破碎细胞,且能实时检测FDH重组蛋白在基因工程菌中表达情况的方法,本研究应用单细胞激光拉曼光谱分析技术(LTRS),研究IPTG诱导不同时间后甲酸脱氢酶重组蛋白(FDH)在大肠杆菌细胞中的表达水平.结果表明,FDH的特征峰1004,1355,1455和1667 cm-1随着IPTG诱导时间的延长而增强,说明在诱导培养过程中FDH重组蛋白在重组大肠杆菌细胞中表达并积累,这4个峰强的增加值所反映的FDH表达量与SDS-PAGE电泳分析结果一致.实验结果证明,LTRS是快速有效检测单个大肠杆菌活细胞体内重组FDH实时表达的一种非入侵方法.
甲痠脫氫酶(FDH,EC1.2.1.2)在工業生產中有重要的應用價值,工業上應用的FDH可以通過構建高水平錶達重組FDH蛋白的基因工程菌生產,用分子生物學的方法檢測重組蛋白的高效錶達和積纍操作繁雜,耗時耗力且需要破碎細胞.為瞭尋找一種簡單快速,不需破碎細胞,且能實時檢測FDH重組蛋白在基因工程菌中錶達情況的方法,本研究應用單細胞激光拉曼光譜分析技術(LTRS),研究IPTG誘導不同時間後甲痠脫氫酶重組蛋白(FDH)在大腸桿菌細胞中的錶達水平.結果錶明,FDH的特徵峰1004,1355,1455和1667 cm-1隨著IPTG誘導時間的延長而增彊,說明在誘導培養過程中FDH重組蛋白在重組大腸桿菌細胞中錶達併積纍,這4箇峰彊的增加值所反映的FDH錶達量與SDS-PAGE電泳分析結果一緻.實驗結果證明,LTRS是快速有效檢測單箇大腸桿菌活細胞體內重組FDH實時錶達的一種非入侵方法.
갑산탈경매(FDH,EC1.2.1.2)재공업생산중유중요적응용개치,공업상응용적FDH가이통과구건고수평표체중조FDH단백적기인공정균생산,용분자생물학적방법검측중조단백적고효표체화적루조작번잡,모시모력차수요파쇄세포.위료심조일충간단쾌속,불수파쇄세포,차능실시검측FDH중조단백재기인공정균중표체정황적방법,본연구응용단세포격광랍만광보분석기술(LTRS),연구IPTG유도불동시간후갑산탈경매중조단백(FDH)재대장간균세포중적표체수평.결과표명,FDH적특정봉1004,1355,1455화1667 cm-1수착IPTG유도시간적연장이증강,설명재유도배양과정중FDH중조단백재중조대장간균세포중표체병적루,저4개봉강적증가치소반영적FDH표체량여SDS-PAGE전영분석결과일치.실험결과증명,LTRS시쾌속유효검측단개대장간균활세포체내중조FDH실시표체적일충비입침방법.
