中国骨质疏松杂志
中國骨質疏鬆雜誌
중국골질소송잡지
CHINESE JOURNAL OF OSTEOPOROSIS
2013年
5期
421-425,440
,共6页
李常虹%赵金霞%孙琳%姚中强%刘蕊%刘湘源
李常虹%趙金霞%孫琳%姚中彊%劉蕊%劉湘源
리상홍%조금하%손림%요중강%류예%류상원
破骨细胞%AG490%RANKL%RAW264.7%JAK2/STAT3
破骨細胞%AG490%RANKL%RAW264.7%JAK2/STAT3
파골세포%AG490%RANKL%RAW264.7%JAK2/STAT3
目的 探讨JAK2/SATA3信号通路对核因子kB受体活化因子配体(Receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的影响.方法 用ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490与RANKL同时处理RAW264.7细胞,倒置显微镜观察细胞形态的变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性破骨细胞形态并计数,采用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测不同诱导条件下RAW264.7中破骨细胞标志分子TRAP、RANK(Receptor activator of NF-κB)、巨噬细胞标志分子CD11b和Emr1及转录因子活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells c1,NFATc1)的mRNA表达情况,细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK8)法检测AG490对RAW264.7细胞增殖的影响,同时应用Western blot法检测STAT3磷酸化情况.结果 ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490可显著抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞的分化,其作用机制主要是通过下调Ser727-STAT3磷酸化水平抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞增殖、进而导致NFATc1转录因子表达水平下降有关.结论 JAK2/STAT3是破骨细胞前体细胞分化成熟过程中的关键信号通路,以此为靶向的特异性抑制剂AG490对于治疗以破骨细胞过度活化为主要特性的疾病具有潜在的应用前景.
目的 探討JAK2/SATA3信號通路對覈因子kB受體活化因子配體(Receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)誘導RAW264.7細胞嚮破骨細胞分化過程的影響.方法 用ATP競爭性JAK2激酶抑製劑AG490與RANKL同時處理RAW264.7細胞,倒置顯微鏡觀察細胞形態的變化,抗酒石痠痠性燐痠酶(Tartrate-resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法觀察TRAP暘性破骨細胞形態併計數,採用反轉錄-聚閤酶鏈式反應(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測不同誘導條件下RAW264.7中破骨細胞標誌分子TRAP、RANK(Receptor activator of NF-κB)、巨噬細胞標誌分子CD11b和Emr1及轉錄因子活化T細胞覈因子(Nuclear Factor of Activated T cells c1,NFATc1)的mRNA錶達情況,細胞計數試劑盒(Cell Counting Kit,CCK8)法檢測AG490對RAW264.7細胞增殖的影響,同時應用Western blot法檢測STAT3燐痠化情況.結果 ATP競爭性JAK2激酶抑製劑AG490可顯著抑製RANKL誘導的RAW264.7細胞嚮破骨細胞的分化,其作用機製主要是通過下調Ser727-STAT3燐痠化水平抑製RANKL誘導的RAW264.7細胞增殖、進而導緻NFATc1轉錄因子錶達水平下降有關.結論 JAK2/STAT3是破骨細胞前體細胞分化成熟過程中的關鍵信號通路,以此為靶嚮的特異性抑製劑AG490對于治療以破骨細胞過度活化為主要特性的疾病具有潛在的應用前景.
목적 탐토JAK2/SATA3신호통로대핵인자kB수체활화인자배체(Receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)유도RAW264.7세포향파골세포분화과정적영향.방법 용ATP경쟁성JAK2격매억제제AG490여RANKL동시처리RAW264.7세포,도치현미경관찰세포형태적변화,항주석산산성린산매(Tartrate-resistant Acid Phosphatase,TRAP)염색법관찰TRAP양성파골세포형태병계수,채용반전록-취합매련식반응(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)검측불동유도조건하RAW264.7중파골세포표지분자TRAP、RANK(Receptor activator of NF-κB)、거서세포표지분자CD11b화Emr1급전록인자활화T세포핵인자(Nuclear Factor of Activated T cells c1,NFATc1)적mRNA표체정황,세포계수시제합(Cell Counting Kit,CCK8)법검측AG490대RAW264.7세포증식적영향,동시응용Western blot법검측STAT3린산화정황.결과 ATP경쟁성JAK2격매억제제AG490가현저억제RANKL유도적RAW264.7세포향파골세포적분화,기작용궤제주요시통과하조Ser727-STAT3린산화수평억제RANKL유도적RAW264.7세포증식、진이도치NFATc1전록인자표체수평하강유관.결론 JAK2/STAT3시파골세포전체세포분화성숙과정중적관건신호통로,이차위파향적특이성억제제AG490대우치료이파골세포과도활화위주요특성적질병구유잠재적응용전경.
