医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2012年
4期
257-261
,共5页
秦栋栋%李凯%曲嘉琳%王森%邹程程%盛艳蕊%汤华
秦棟棟%李凱%麯嘉琳%王森%鄒程程%盛豔蕊%湯華
진동동%리개%곡가림%왕삼%추정정%성염예%탕화
HBx%HBs%RhoC%启动子%Ets-1转录因子
HBx%HBs%RhoC%啟動子%Ets-1轉錄因子
HBx%HBs%RhoC%계동자%Ets-1전록인자
目的 探讨HBx(hepatitis B virus X protein)及HBs(hepatitis B virus S protein)对RhoC启动子的作用机制,分析可能相互作用的启动子调控元件.方法构建RhoC启动子截短突变克隆,双荧光素酶报告分析系统(the dual-luciferase reporter assay system)检测RhoC启动子相对荧光素酶活性,通过分析启动子相对活性变化进而筛寻到起调控作用的启动子区段.过表达Ets-1转录因子,检测RhoC启动子相对荧光素酶活性.结果①成功构建了5个RhoC启动子截短变异克隆.② 分别在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中验证了RhoC截短变异启动子活性,确定了起关键作用的启动子区段(-491 bp～-320 bp、-124 bp～-58 bp).③ HepG2细胞中分别过表达HBx及HBs,发现启动子区段-491 bp～-320 bp及-187 bp～-124 bp可以被HBx及HBs调控.④文献检索结合软件分析这些启动子区段序列,找到了高度相关的转录因子Ets-1、NF-κΒ、Sp1等.⑤ 荧光素酶检测和Real-time PCR初步验证了转录因子Ets-1对RhoC的调控作用.结论 HBx及HBs可能通过Ets-1等转录因子调控RhoC启动子进而上调RhoC启动子活性.
目的 探討HBx(hepatitis B virus X protein)及HBs(hepatitis B virus S protein)對RhoC啟動子的作用機製,分析可能相互作用的啟動子調控元件.方法構建RhoC啟動子截短突變剋隆,雙熒光素酶報告分析繫統(the dual-luciferase reporter assay system)檢測RhoC啟動子相對熒光素酶活性,通過分析啟動子相對活性變化進而篩尋到起調控作用的啟動子區段.過錶達Ets-1轉錄因子,檢測RhoC啟動子相對熒光素酶活性.結果①成功構建瞭5箇RhoC啟動子截短變異剋隆.② 分彆在HepG2細胞和HepG2.2.15細胞中驗證瞭RhoC截短變異啟動子活性,確定瞭起關鍵作用的啟動子區段(-491 bp～-320 bp、-124 bp～-58 bp).③ HepG2細胞中分彆過錶達HBx及HBs,髮現啟動子區段-491 bp～-320 bp及-187 bp～-124 bp可以被HBx及HBs調控.④文獻檢索結閤軟件分析這些啟動子區段序列,找到瞭高度相關的轉錄因子Ets-1、NF-κΒ、Sp1等.⑤ 熒光素酶檢測和Real-time PCR初步驗證瞭轉錄因子Ets-1對RhoC的調控作用.結論 HBx及HBs可能通過Ets-1等轉錄因子調控RhoC啟動子進而上調RhoC啟動子活性.
목적 탐토HBx(hepatitis B virus X protein)급HBs(hepatitis B virus S protein)대RhoC계동자적작용궤제,분석가능상호작용적계동자조공원건.방법구건RhoC계동자절단돌변극륭,쌍형광소매보고분석계통(the dual-luciferase reporter assay system)검측RhoC계동자상대형광소매활성,통과분석계동자상대활성변화진이사심도기조공작용적계동자구단.과표체Ets-1전록인자,검측RhoC계동자상대형광소매활성.결과①성공구건료5개RhoC계동자절단변이극륭.② 분별재HepG2세포화HepG2.2.15세포중험증료RhoC절단변이계동자활성,학정료기관건작용적계동자구단(-491 bp～-320 bp、-124 bp～-58 bp).③ HepG2세포중분별과표체HBx급HBs,발현계동자구단-491 bp～-320 bp급-187 bp～-124 bp가이피HBx급HBs조공.④문헌검색결합연건분석저사계동자구단서렬,조도료고도상관적전록인자Ets-1、NF-κΒ、Sp1등.⑤ 형광소매검측화Real-time PCR초보험증료전록인자Ets-1대RhoC적조공작용.결론 HBx급HBs가능통과Ets-1등전록인자조공RhoC계동자진이상조RhoC계동자활성.
