CAJ | 학술논문

目的探讨依据寡核苷酸等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)扩增及连接酶检测反应(LDR)方法检测乙型肝炎病毒(HBV)4种核苷(酸)类似物耐药突变的可行性.方法以基因库公布的981条HBV基因序列为基础,针对拉米夫啶、替比夫啶、阿德福韦和恩替卡韦8个耐药位点上的氨基酸替换形式,设计15对特异性引物,采用多重PCR扩增HBV P基因区野生型和突变型目的片段,然后进行多重LDR,最后在ABI3130测序仪上电泳,根据内参标记、LDR产物的长度进行结果判读.应用此方法对12例慢性HBV感染患者血清进行检测,同时采用荧光PCR、焦磷酸测序技术对其验证,判断其特异性和准确性.结果 LDR法能有效区分包括rtL180M、YMDD、YIDD、YVDD、rtA181V/T、rtN236T、rtT184G、rtS202I、rtM250V野生株和部分突变株;4例HBV DNA>106 copy/mL患者检测出野生株和突变株,结果与焦磷酸测序一致;LDR法与荧光PCR法检测结果一致率达83.3%(10/12).结论血清HBV DNA>106 copy/mL时结合多重PCR的复合LDR 可通过一次扩增检测产物中的多个单突变或野生型位点,有助于核苷(酸)类似物耐药的诊断和治疗.
목적 탐토의거과핵감산등위기인특이성취합매련반응(PCR)확증급련접매검측반응(LDR)방법검측을형간염병독(HBV)4충핵감(산)유사물내약돌변적가행성.방법 이기인고공포적981조HBV기인서렬위기출,침대랍미부정、체비부정、아덕복위화은체잡위8개내약위점상적안기산체환형식,설계15대특이성인물,채용다중PCR확증HBV P기인구야생형화돌변형목적 편단,연후진행다중LDR,최후재ABI3130측서의상전영,근거내삼표기、LDR산물적장도진행결과판독.응용차방법대12례만성HBV감염환자혈청진행검측,동시채용형광PCR、초린산측서기술대기험증,판단기특이성화준학성.결과 LDR법능유효구분포괄rtL180M、YMDD、YIDD、YVDD、rtA181V/T、rtN236T、rtT184G、rtS202I、rtM250V야생주화부분돌변주;4례HBV DNA>106 copy/mL환자검측출야생주화돌변주,결과여초린산측서일치;LDR법여형광PCR법검측결과일치솔체83.3%(10/12).결론혈청HBV DNA>106 copy/mL시결합다중PCR적복합LDR 가통과일차확증검측산물중적다개단돌변혹야생형위점,유조우핵감(산)유사물내약적진단화치료.