华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2013年
1期
8-11
,共4页
β2-spectrin%AML-12细胞株%细胞增殖%细胞周期%细胞凋亡
β2-spectrin%AML-12細胞株%細胞增殖%細胞週期%細胞凋亡
β2-spectrin%AML-12세포주%세포증식%세포주기%세포조망
目的 应用特异性siRNA干扰小鼠肝细胞株AML-12中β2-spectrin表达,检测AML-12细胞增殖凋亡以及细胞周期的改变.方法 化学合成β2-spectrin特异性siRNA,分别转染AML-12细胞,荧光定量PCR和Western blot 确定其抑制效果.AML-12细胞经TGF-β细胞因子处理4 h后,转染β2-spectrin特异性siRNA,48 h后,BrdU标记法以及流式细胞术检测β2-spectrin沉默前后AML-12细胞增殖、凋亡以及周期变化;共聚焦技术检测干扰β2-spectrin表达对TGF-β/Smad信号通路中Smad3、Smad4核定位的影响.结果 siRNA可以高效特异沉默β2-spectrin 的表达.流式细胞术检测显示,β2-spectrin沉默促进AML-12细胞增殖,抑制凋亡,S期细胞比例显著升高.免疫荧光结果 显示,TGF-β处理后,Smad3、Smad4表达定位于细胞核,沉默β2-spectrin干扰Smad3、Smad4细胞核内定位.结论 沉默β2-spectrin的表达促进AML-12增殖,抑制凋亡,促进细胞向S期转化.其机制可能是通过干扰Smad3、Smad4核定位而抑制TGF-β/Smad信号通路,进而发挥诱导凋亡效应.
目的 應用特異性siRNA榦擾小鼠肝細胞株AML-12中β2-spectrin錶達,檢測AML-12細胞增殖凋亡以及細胞週期的改變.方法 化學閤成β2-spectrin特異性siRNA,分彆轉染AML-12細胞,熒光定量PCR和Western blot 確定其抑製效果.AML-12細胞經TGF-β細胞因子處理4 h後,轉染β2-spectrin特異性siRNA,48 h後,BrdU標記法以及流式細胞術檢測β2-spectrin沉默前後AML-12細胞增殖、凋亡以及週期變化;共聚焦技術檢測榦擾β2-spectrin錶達對TGF-β/Smad信號通路中Smad3、Smad4覈定位的影響.結果 siRNA可以高效特異沉默β2-spectrin 的錶達.流式細胞術檢測顯示,β2-spectrin沉默促進AML-12細胞增殖,抑製凋亡,S期細胞比例顯著升高.免疫熒光結果 顯示,TGF-β處理後,Smad3、Smad4錶達定位于細胞覈,沉默β2-spectrin榦擾Smad3、Smad4細胞覈內定位.結論 沉默β2-spectrin的錶達促進AML-12增殖,抑製凋亡,促進細胞嚮S期轉化.其機製可能是通過榦擾Smad3、Smad4覈定位而抑製TGF-β/Smad信號通路,進而髮揮誘導凋亡效應.
목적 응용특이성siRNA간우소서간세포주AML-12중β2-spectrin표체,검측AML-12세포증식조망이급세포주기적개변.방법 화학합성β2-spectrin특이성siRNA,분별전염AML-12세포,형광정량PCR화Western blot 학정기억제효과.AML-12세포경TGF-β세포인자처리4 h후,전염β2-spectrin특이성siRNA,48 h후,BrdU표기법이급류식세포술검측β2-spectrin침묵전후AML-12세포증식、조망이급주기변화;공취초기술검측간우β2-spectrin표체대TGF-β/Smad신호통로중Smad3、Smad4핵정위적영향.결과 siRNA가이고효특이침묵β2-spectrin 적표체.류식세포술검측현시,β2-spectrin침묵촉진AML-12세포증식,억제조망,S기세포비례현저승고.면역형광결과 현시,TGF-β처리후,Smad3、Smad4표체정위우세포핵,침묵β2-spectrin간우Smad3、Smad4세포핵내정위.결론 침묵β2-spectrin적표체촉진AML-12증식,억제조망,촉진세포향S기전화.기궤제가능시통과간우Smad3、Smad4핵정위이억제TGF-β/Smad신호통로,진이발휘유도조망효응.
