实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2013年
1期
18-20
,共3页
林蓉%张凯帆%王维蓉%林琴琴%杨莉娜%任峰%张建丰
林蓉%張凱帆%王維蓉%林琴琴%楊莉娜%任峰%張建豐
림용%장개범%왕유용%림금금%양리나%임봉%장건봉
心血管疾病%SIRT1%稳定过表达%HEK293细胞
心血管疾病%SIRT1%穩定過錶達%HEK293細胞
심혈관질병%SIRT1%은정과표체%HEK293세포
目的:构建人沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表达载体,建立稳定过表达人SIRT1的HEK293细胞系.方法:将含有SIRT1的克隆载体pCRⅡ-TOPO-SIRT1双酶切后,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,连接产物经酶切鉴定后进行测序.构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRT1转染HEK293细胞.G418进行筛选.Real-time PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测SIRTI的表达.结果:酶切分析和测序结果证实,SIRT1基因成功插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中.Real-time PCR和Western Blot结果显示稳定转染pc:DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293细胞SIRT1的表达水平明显高于未转染细胞(P<0.01).结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了稳定过表达SIRT1基因的HEK293细胞系.为进-步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其机制奠定了基础.
目的:構建人沉默信息調節因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真覈錶達載體,建立穩定過錶達人SIRT1的HEK293細胞繫.方法:將含有SIRT1的剋隆載體pCRⅡ-TOPO-SIRT1雙酶切後,連接至真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中,連接產物經酶切鑒定後進行測序.構建的重組真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-SIRT1轉染HEK293細胞.G418進行篩選.Real-time PCR和Western Blot分彆從mRNA和蛋白水平檢測SIRTI的錶達.結果:酶切分析和測序結果證實,SIRT1基因成功插入真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)中.Real-time PCR和Western Blot結果顯示穩定轉染pc:DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293細胞SIRT1的錶達水平明顯高于未轉染細胞(P<0.01).結論:成功構建瞭真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-SIRT1,併建立瞭穩定過錶達SIRT1基因的HEK293細胞繫.為進-步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其機製奠定瞭基礎.
목적:구건인침묵신식조절인자2동원단백1(SIRT1)기인적진핵표체재체,건립은정과표체인SIRT1적HEK293세포계.방법:장함유SIRT1적극륭재체pCRⅡ-TOPO-SIRT1쌍매절후,련접지진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,련접산물경매절감정후진행측서.구건적중조진핵표체질립pcDNA3.1(+)-SIRT1전염HEK293세포.G418진행사선.Real-time PCR화Western Blot분별종mRNA화단백수평검측SIRTI적표체.결과:매절분석화측서결과증실,SIRT1기인성공삽입진핵표체질립pcDNA3.1(+)중.Real-time PCR화Western Blot결과현시은정전염pc:DNA3.1(+)-SIRT1적HEK293세포SIRT1적표체수평명현고우미전염세포(P<0.01).결론:성공구건료진핵표체재체pcDNA3.1(+)-SIRT1,병건립료은정과표체SIRT1기인적HEK293세포계.위진-보연구SIRT1기인재심혈관질병중적작용급기궤제전정료기출.
