现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2013年
1期
7-11
,共5页
屈玲%黄萍%苏明权%郑善銮%马越云%郝晓柯
屈玲%黃萍%囌明權%鄭善鑾%馬越雲%郝曉柯
굴령%황평%소명권%정선란%마월운%학효가
幽门螺杆菌%过氧化氢酶%重组表达%免疫学特性
幽門螺桿菌%過氧化氫酶%重組錶達%免疫學特性
유문라간균%과양화경매%중조표체%면역학특성
目的 对幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)的过氧化氢酶(catalase,KatA)进行重组表达和纯化,并进行免疫学特性研究.方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌katA全长基因,构建重组表达载体pET-28a-katA,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,通过包涵体洗涤和亲和层析纯化出重组蛋白,并采用Western blot和ELISA等方法对其进行免疫学特性研究.结果 克隆出幽门螺杆菌1 518 bp的全长katA基因,在大肠埃希菌中诱导表达出505个氨基酸组成、分子量约为58 000的重组KatA蛋白,其表达量约占细菌总蛋白的20%,且以包涵体形式表达.经亲和层析的重组蛋白纯度约为85%,并可与兔抗Hp抗血清发生特异性反应.通过重组蛋白的动物免疫可产生高效价抗血清,并特异性识别多种Hp菌株.结论 成功重组表达与纯化出幽门螺杆菌KatA蛋白,并具备良好的免疫学特性,为Hp致病机制、血清学诊断以及亚单位疫苗研究奠定重要的实验基础.
目的 對幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)的過氧化氫酶(catalase,KatA)進行重組錶達和純化,併進行免疫學特性研究.方法 採用PCR擴增幽門螺桿菌katA全長基因,構建重組錶達載體pET-28a-katA,在大腸埃希菌BL21(DE3)中錶達,通過包涵體洗滌和親和層析純化齣重組蛋白,併採用Western blot和ELISA等方法對其進行免疫學特性研究.結果 剋隆齣幽門螺桿菌1 518 bp的全長katA基因,在大腸埃希菌中誘導錶達齣505箇氨基痠組成、分子量約為58 000的重組KatA蛋白,其錶達量約佔細菌總蛋白的20%,且以包涵體形式錶達.經親和層析的重組蛋白純度約為85%,併可與兔抗Hp抗血清髮生特異性反應.通過重組蛋白的動物免疫可產生高效價抗血清,併特異性識彆多種Hp菌株.結論 成功重組錶達與純化齣幽門螺桿菌KatA蛋白,併具備良好的免疫學特性,為Hp緻病機製、血清學診斷以及亞單位疫苗研究奠定重要的實驗基礎.
목적 대유문라간균(helicobacter pylori,Hp)적과양화경매(catalase,KatA)진행중조표체화순화,병진행면역학특성연구.방법 채용PCR확증유문라간균katA전장기인,구건중조표체재체pET-28a-katA,재대장애희균BL21(DE3)중표체,통과포함체세조화친화층석순화출중조단백,병채용Western blot화ELISA등방법대기진행면역학특성연구.결과 극륭출유문라간균1 518 bp적전장katA기인,재대장애희균중유도표체출505개안기산조성、분자량약위58 000적중조KatA단백,기표체량약점세균총단백적20%,차이포함체형식표체.경친화층석적중조단백순도약위85%,병가여토항Hp항혈청발생특이성반응.통과중조단백적동물면역가산생고효개항혈청,병특이성식별다충Hp균주.결론 성공중조표체여순화출유문라간균KatA단백,병구비량호적면역학특성,위Hp치병궤제、혈청학진단이급아단위역묘연구전정중요적실험기출.
