遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2013年
2期
233-240
,共8页
龚文芳%路立京%刘鑫%陈喜文%陈德富
龔文芳%路立京%劉鑫%陳喜文%陳德富
공문방%로립경%류흠%진희문%진덕부
雨生红球藻%番茄红素β-环化酶%RNAi%番茄红素%代谢通路
雨生紅毬藻%番茄紅素β-環化酶%RNAi%番茄紅素%代謝通路
우생홍구조%번가홍소β-배화매%RNAi%번가홍소%대사통로
雨生红球藻是一种淡水浮游单细胞绿藻,逆境条件下可积累大量的类胡萝卜素.番茄红素是类胡萝卜素中的一种,是类胡萝卜素合成代谢中的一个重要中间产物.番茄红素β-环化酶(LycB)是催化番茄红素形成β-胡萝卜素的关键酶.文章以杜氏盐藻lycB 基因为干扰序列,构建了含卡那霉素与阿特拉津双抗性的RNAi 载体p1301-BS-RNAi.将其电转化进雨生红球藻细胞,经抗性筛选、基因组PCR 及RT-PCR 筛选,获得了16 个独立的干扰株系.选取生长良好的7 个进行高光诱导,发现其番茄红素含量增加了99.4%,β-胡萝卜素含量减少了48.4%,即通过异源的lycB-RNAi 基因沉默可抑制番茄红素向β-胡萝卜素的转化.对比分析发现,番茄红素增加量仅是β-胡萝卜素减少量的5%,表明因lycB-RNAi 抑制而产生的番茄红素的95%又被其他通路转换成了其他代谢产物,因此要实现雨生红球藻番茄红素含量的大幅增长,需协同调控其他代谢通路.
雨生紅毬藻是一種淡水浮遊單細胞綠藻,逆境條件下可積纍大量的類鬍蘿蔔素.番茄紅素是類鬍蘿蔔素中的一種,是類鬍蘿蔔素閤成代謝中的一箇重要中間產物.番茄紅素β-環化酶(LycB)是催化番茄紅素形成β-鬍蘿蔔素的關鍵酶.文章以杜氏鹽藻lycB 基因為榦擾序列,構建瞭含卡那黴素與阿特拉津雙抗性的RNAi 載體p1301-BS-RNAi.將其電轉化進雨生紅毬藻細胞,經抗性篩選、基因組PCR 及RT-PCR 篩選,穫得瞭16 箇獨立的榦擾株繫.選取生長良好的7 箇進行高光誘導,髮現其番茄紅素含量增加瞭99.4%,β-鬍蘿蔔素含量減少瞭48.4%,即通過異源的lycB-RNAi 基因沉默可抑製番茄紅素嚮β-鬍蘿蔔素的轉化.對比分析髮現,番茄紅素增加量僅是β-鬍蘿蔔素減少量的5%,錶明因lycB-RNAi 抑製而產生的番茄紅素的95%又被其他通路轉換成瞭其他代謝產物,因此要實現雨生紅毬藻番茄紅素含量的大幅增長,需協同調控其他代謝通路.
우생홍구조시일충담수부유단세포록조,역경조건하가적루대량적류호라복소.번가홍소시류호라복소중적일충,시류호라복소합성대사중적일개중요중간산물.번가홍소β-배화매(LycB)시최화번가홍소형성β-호라복소적관건매.문장이두씨염조lycB 기인위간우서렬,구건료함잡나매소여아특랍진쌍항성적RNAi 재체p1301-BS-RNAi.장기전전화진우생홍구조세포,경항성사선、기인조PCR 급RT-PCR 사선,획득료16 개독립적간우주계.선취생장량호적7 개진행고광유도,발현기번가홍소함량증가료99.4%,β-호라복소함량감소료48.4%,즉통과이원적lycB-RNAi 기인침묵가억제번가홍소향β-호라복소적전화.대비분석발현,번가홍소증가량부시β-호라복소감소량적5%,표명인lycB-RNAi 억제이산생적번가홍소적95%우피기타통로전환성료기타대사산물,인차요실현우생홍구조번가홍소함량적대폭증장,수협동조공기타대사통로.
