临床与实验病理学杂志
臨床與實驗病理學雜誌
림상여실험병이학잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL PATHOLOGY
2013年
2期
138-140
,共3页
刘璐%徐晓婷%秦磊%金晓红%顾冬梅%王修珍%刘蔚
劉璐%徐曉婷%秦磊%金曉紅%顧鼕梅%王脩珍%劉蔚
류로%서효정%진뢰%금효홍%고동매%왕수진%류위
BRCA2基因%启动子%克隆%基因调控
BRCA2基因%啟動子%剋隆%基因調控
BRCA2기인%계동자%극륭%기인조공
目的 构建BRCA2基因启动子的荧光素酶报告质粒,为BRCA2基因调控研究提供基础.方法 采用高保真Taq聚合酶,从正常人外周血中扩增出BRCA2启动子并将其插入质粒中.通过基于PCR的定点突变方法在多态性位点rs3092989(-254A/G)获得含-254G等位基因的序列.亚克隆BRCA2启动子片段至pGL3-basic报告基因载体中,构建含BRCA2启动子的重组报告质粒.转染HeLa细胞,评价启动子活性以及-254A/G多态性位点对活性的影响.结果 酶切和直接测序法证实所构建质粒含有pGL3-basic及BRCA2基因启动子序列,扩增的含-254A和-254G的BRCA2启动子序列正确.构建的报告基因具有启动子活性,与pGL3-basic质粒相比较,BRCA2启动子的相对荧光单位增加了413倍.rs3092989(-254A/G)多态位点未明显影响启动子活性.结论 BRCA2转录起始位点上游序列具有较强的启动子活性.成功克隆BRCA2启动子并引入相关突变,可为后续的基因转录调控研究奠定基础.
目的 構建BRCA2基因啟動子的熒光素酶報告質粒,為BRCA2基因調控研究提供基礎.方法 採用高保真Taq聚閤酶,從正常人外週血中擴增齣BRCA2啟動子併將其插入質粒中.通過基于PCR的定點突變方法在多態性位點rs3092989(-254A/G)穫得含-254G等位基因的序列.亞剋隆BRCA2啟動子片段至pGL3-basic報告基因載體中,構建含BRCA2啟動子的重組報告質粒.轉染HeLa細胞,評價啟動子活性以及-254A/G多態性位點對活性的影響.結果 酶切和直接測序法證實所構建質粒含有pGL3-basic及BRCA2基因啟動子序列,擴增的含-254A和-254G的BRCA2啟動子序列正確.構建的報告基因具有啟動子活性,與pGL3-basic質粒相比較,BRCA2啟動子的相對熒光單位增加瞭413倍.rs3092989(-254A/G)多態位點未明顯影響啟動子活性.結論 BRCA2轉錄起始位點上遊序列具有較彊的啟動子活性.成功剋隆BRCA2啟動子併引入相關突變,可為後續的基因轉錄調控研究奠定基礎.
목적 구건BRCA2기인계동자적형광소매보고질립,위BRCA2기인조공연구제공기출.방법 채용고보진Taq취합매,종정상인외주혈중확증출BRCA2계동자병장기삽입질립중.통과기우PCR적정점돌변방법재다태성위점rs3092989(-254A/G)획득함-254G등위기인적서렬.아극륭BRCA2계동자편단지pGL3-basic보고기인재체중,구건함BRCA2계동자적중조보고질립.전염HeLa세포,평개계동자활성이급-254A/G다태성위점대활성적영향.결과 매절화직접측서법증실소구건질립함유pGL3-basic급BRCA2기인계동자서렬,확증적함-254A화-254G적BRCA2계동자서렬정학.구건적보고기인구유계동자활성,여pGL3-basic질립상비교,BRCA2계동자적상대형광단위증가료413배.rs3092989(-254A/G)다태위점미명현영향계동자활성.결론 BRCA2전록기시위점상유서렬구유교강적계동자활성.성공극륭BRCA2계동자병인입상관돌변,가위후속적기인전록조공연구전정기출.
