东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2013年
2期
145-149
,共5页
李小青%茅家慧%胡亚娥%施海燕%沈之君
李小青%茅傢慧%鬍亞娥%施海燕%瀋之君
리소청%모가혜%호아아%시해연%침지군
N-糖基化%KCNE1%转运%蛋白囤积%KCNQ1
N-糖基化%KCNE1%轉運%蛋白囤積%KCNQ1
N-당기화%KCNE1%전운%단백돈적%KCNQ1
目的:探究N-糖基化在KCNE1功能中的作用.方法:根据N-糖基化序列特征"Asn-X-Ser/Thr"分析和N-糖基化特异消化酶实验检测KCNE1是否存在N-糖基化,通过点突变构建N-糖基化位点突变体并通过蛋白质印迹法检测其蛋白表达,细胞免疫荧光染色检测突变体亚细胞定位;免疫共沉淀检测突变体与KCNQ1的相互作用.结果:KCNE1存在N-糖基化,N5和N26是其可能位点;点突变获得KCNE1-N5Q、KCNE1-N26Q和KCNE1-N5,26Q 3个突变体.蛋白质印迹法确定N5和N26为KCNE1的两个糖基化位点;与野生型相比,突变体在细胞内呈现不同程度的蛋白囤积现象,KCNE1-N26Q表现尤为显著,KCNE1-N5,26Q和KCNE1-N5Q则表现略轻;KCNE1 N-糖基化突变体仍能与KCNQ1结合.结论:N-糖基化在KCNE1转运中发挥重要作用,其中N26较为关键;N-糖基化在KCNE1与KCNQ1之间的相互作用中不起重要作用.
目的:探究N-糖基化在KCNE1功能中的作用.方法:根據N-糖基化序列特徵"Asn-X-Ser/Thr"分析和N-糖基化特異消化酶實驗檢測KCNE1是否存在N-糖基化,通過點突變構建N-糖基化位點突變體併通過蛋白質印跡法檢測其蛋白錶達,細胞免疫熒光染色檢測突變體亞細胞定位;免疫共沉澱檢測突變體與KCNQ1的相互作用.結果:KCNE1存在N-糖基化,N5和N26是其可能位點;點突變穫得KCNE1-N5Q、KCNE1-N26Q和KCNE1-N5,26Q 3箇突變體.蛋白質印跡法確定N5和N26為KCNE1的兩箇糖基化位點;與野生型相比,突變體在細胞內呈現不同程度的蛋白囤積現象,KCNE1-N26Q錶現尤為顯著,KCNE1-N5,26Q和KCNE1-N5Q則錶現略輕;KCNE1 N-糖基化突變體仍能與KCNQ1結閤.結論:N-糖基化在KCNE1轉運中髮揮重要作用,其中N26較為關鍵;N-糖基化在KCNE1與KCNQ1之間的相互作用中不起重要作用.
목적:탐구N-당기화재KCNE1공능중적작용.방법:근거N-당기화서렬특정"Asn-X-Ser/Thr"분석화N-당기화특이소화매실험검측KCNE1시부존재N-당기화,통과점돌변구건N-당기화위점돌변체병통과단백질인적법검측기단백표체,세포면역형광염색검측돌변체아세포정위;면역공침정검측돌변체여KCNQ1적상호작용.결과:KCNE1존재N-당기화,N5화N26시기가능위점;점돌변획득KCNE1-N5Q、KCNE1-N26Q화KCNE1-N5,26Q 3개돌변체.단백질인적법학정N5화N26위KCNE1적량개당기화위점;여야생형상비,돌변체재세포내정현불동정도적단백돈적현상,KCNE1-N26Q표현우위현저,KCNE1-N5,26Q화KCNE1-N5Q칙표현략경;KCNE1 N-당기화돌변체잉능여KCNQ1결합.결론:N-당기화재KCNE1전운중발휘중요작용,기중N26교위관건;N-당기화재KCNE1여KCNQ1지간적상호작용중불기중요작용.
