临床肺科杂志
臨床肺科雜誌
림상폐과잡지
JOUNAL OF CLINICAL PULMONARY MEDICINE
2013年
4期
683-686
,共4页
郭亮%谢晓%胡丰庆%梅举%丁芳宝%肖海波
郭亮%謝曉%鬍豐慶%梅舉%丁芳寶%肖海波
곽량%사효%호봉경%매거%정방보%초해파
人β干扰素%慢病毒载体%基因转染%A549%细胞
人β榦擾素%慢病毒載體%基因轉染%A549%細胞
인β간우소%만병독재체%기인전염%A549%세포
目的 构建人β干扰素(IFN-β)基因重组慢病毒,体外转染人肺癌A549细胞,观察IFN-β基因的表达及其对A549细胞的增殖抑制作用.方法 通过聚合酶链反应(PCR)获得人IFN-β基因,克隆到慢病毒载体,通过转染293细胞包装制备慢病毒液,并体外感染A549细胞,采用RT-PCR及Western Blot检测IFN-β基因在A549细胞中的表达情况.应用MTS法检测转染后对A549细胞增殖的影响.结果 IFN -β基因重组质粒经酶切后电泳结果显示能得到与理论大小相符的片段,基因测序结果与GenBank序列完全一致,重组质粒经鉴定正确,转染293细胞获得病毒滴度为3×107 PFU/ml,体外感染A549细胞后,RT-PCR、Western Blot检测IFN-β表达水平明显增高,并可明显抑制A549细胞增殖.结论 本研究成功构建IFN-β基因重组慢病毒,体外感染后能够稳定表达并抑制A549细胞增殖,为应用IFN-β基因治疗肺癌奠定初步基础.
目的 構建人β榦擾素(IFN-β)基因重組慢病毒,體外轉染人肺癌A549細胞,觀察IFN-β基因的錶達及其對A549細胞的增殖抑製作用.方法 通過聚閤酶鏈反應(PCR)穫得人IFN-β基因,剋隆到慢病毒載體,通過轉染293細胞包裝製備慢病毒液,併體外感染A549細胞,採用RT-PCR及Western Blot檢測IFN-β基因在A549細胞中的錶達情況.應用MTS法檢測轉染後對A549細胞增殖的影響.結果 IFN -β基因重組質粒經酶切後電泳結果顯示能得到與理論大小相符的片段,基因測序結果與GenBank序列完全一緻,重組質粒經鑒定正確,轉染293細胞穫得病毒滴度為3×107 PFU/ml,體外感染A549細胞後,RT-PCR、Western Blot檢測IFN-β錶達水平明顯增高,併可明顯抑製A549細胞增殖.結論 本研究成功構建IFN-β基因重組慢病毒,體外感染後能夠穩定錶達併抑製A549細胞增殖,為應用IFN-β基因治療肺癌奠定初步基礎.
목적 구건인β간우소(IFN-β)기인중조만병독,체외전염인폐암A549세포,관찰IFN-β기인적표체급기대A549세포적증식억제작용.방법 통과취합매련반응(PCR)획득인IFN-β기인,극륭도만병독재체,통과전염293세포포장제비만병독액,병체외감염A549세포,채용RT-PCR급Western Blot검측IFN-β기인재A549세포중적표체정황.응용MTS법검측전염후대A549세포증식적영향.결과 IFN -β기인중조질립경매절후전영결과현시능득도여이론대소상부적편단,기인측서결과여GenBank서렬완전일치,중조질립경감정정학,전염293세포획득병독적도위3×107 PFU/ml,체외감염A549세포후,RT-PCR、Western Blot검측IFN-β표체수평명현증고,병가명현억제A549세포증식.결론 본연구성공구건IFN-β기인중조만병독,체외감염후능구은정표체병억제A549세포증식,위응용IFN-β기인치료폐암전정초보기출.
