重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2013年
8期
841-844
,共4页
李汇%毛用敏%赵莉莉%崔让庄%王佩显
李彙%毛用敏%趙莉莉%崔讓莊%王珮顯
리회%모용민%조리리%최양장%왕패현
腺病毒,人%金属蛋白酶组织抑制剂1%基因治疗
腺病毒,人%金屬蛋白酶組織抑製劑1%基因治療
선병독,인%금속단백매조직억제제1%기인치료
目的 构建携带人金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的重组腺病毒AdV-hTIMP1,感染体外培养的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,观察其mRNA表达情况.方法 应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统在大肠埃希菌BJ5183中通过同源重组构建Ad-hTIMP1和对照Ad-Track.阳离子脂质体法将重组腺病毒转染到人胚胎肾细胞(HEK293T)中进行包装和扩增.纯化后PCR鉴定hTIMP1目的 基因,OD260法测定滴度,透射电镜观察腺病毒形态.将人脐静脉内皮细胞CRL-1730分为3组,空白对照组、Track对照组和TIMP1实验组,感染48 h后收集细胞,半定量PCR(RT-PCR)法检测内皮细胞中TIMP1 mRNA的表达情况.结果 重组腺病毒Ad-hTIMP1的滴度为1.9×1012v.p/mL.其感染人脐静脉内皮细胞CRL-1730后,实验组TIMP1 mRNA的表达明显升高(P<0.05).结论 成功构建了携带hTIMP1基因的重组腺病毒Ad-hTIMP1,成功感染了体外培养的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,使细胞中hTIMP1过表达,为心血管疾病的基因治疗提供平台.
目的 構建攜帶人金屬蛋白酶組織抑製劑1(TIMP1)的重組腺病毒AdV-hTIMP1,感染體外培養的人臍靜脈內皮細胞CRL-1730,觀察其mRNA錶達情況.方法 應用AdEasy複製缺陷型腺病毒載體繫統在大腸埃希菌BJ5183中通過同源重組構建Ad-hTIMP1和對照Ad-Track.暘離子脂質體法將重組腺病毒轉染到人胚胎腎細胞(HEK293T)中進行包裝和擴增.純化後PCR鑒定hTIMP1目的 基因,OD260法測定滴度,透射電鏡觀察腺病毒形態.將人臍靜脈內皮細胞CRL-1730分為3組,空白對照組、Track對照組和TIMP1實驗組,感染48 h後收集細胞,半定量PCR(RT-PCR)法檢測內皮細胞中TIMP1 mRNA的錶達情況.結果 重組腺病毒Ad-hTIMP1的滴度為1.9×1012v.p/mL.其感染人臍靜脈內皮細胞CRL-1730後,實驗組TIMP1 mRNA的錶達明顯升高(P<0.05).結論 成功構建瞭攜帶hTIMP1基因的重組腺病毒Ad-hTIMP1,成功感染瞭體外培養的人臍靜脈內皮細胞CRL-1730,使細胞中hTIMP1過錶達,為心血管疾病的基因治療提供平檯.
목적 구건휴대인금속단백매조직억제제1(TIMP1)적중조선병독AdV-hTIMP1,감염체외배양적인제정맥내피세포CRL-1730,관찰기mRNA표체정황.방법 응용AdEasy복제결함형선병독재체계통재대장애희균BJ5183중통과동원중조구건Ad-hTIMP1화대조Ad-Track.양리자지질체법장중조선병독전염도인배태신세포(HEK293T)중진행포장화확증.순화후PCR감정hTIMP1목적 기인,OD260법측정적도,투사전경관찰선병독형태.장인제정맥내피세포CRL-1730분위3조,공백대조조、Track대조조화TIMP1실험조,감염48 h후수집세포,반정량PCR(RT-PCR)법검측내피세포중TIMP1 mRNA적표체정황.결과 중조선병독Ad-hTIMP1적적도위1.9×1012v.p/mL.기감염인제정맥내피세포CRL-1730후,실험조TIMP1 mRNA적표체명현승고(P<0.05).결론 성공구건료휴대hTIMP1기인적중조선병독Ad-hTIMP1,성공감염료체외배양적인제정맥내피세포CRL-1730,사세포중hTIMP1과표체,위심혈관질병적기인치료제공평태.
