微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2013年
2期
19-23
,共5页
詹骞%刘志飞%彭祥兵%宁浩然%陈雯%张爱华%杨晓明
詹鶱%劉誌飛%彭祥兵%寧浩然%陳雯%張愛華%楊曉明
첨건%류지비%팽상병%저호연%진문%장애화%양효명
百日咳毒素%单克隆抗体%酶联免疫吸附试验
百日咳毒素%單剋隆抗體%酶聯免疫吸附試驗
백일해독소%단극륭항체%매련면역흡부시험
目的 制备百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA用于检测PT的含量.方法 采用杂交瘤技术制备PT的单抗,并对其进行鉴定；优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证；应用建立的方法检测武汉生物制品研究所有限责任公司(简称武汉公司)73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT含量.结果 获得4株稳定的抗PT杂交瘤细胞株,抗体亚型均为IgG2a,抗体腹水ELISA效价达1∶106以上,均能与PT发生特异反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉和破伤风类毒素未发生交叉反应；建立的双抗体夹心ELISA的线性检测范围在2.50～80.00 ng/mL之间,酶标板内和板间变异系数均小于10％；PT的高、中、低浓度的回收率分别为97.41％、106.60％和89.98％；73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT质量浓度在50.00 ～ 150.00 ng/mL之间波动,说明中间产物的批间一致性及稳定性趋势良好.结论 已成功制备了抗PT的单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测PT的双抗体夹心ELISA,可用于无细胞百日咳疫苗生产中PT的定量检测.
目的 製備百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的單剋隆抗體,併建立雙抗體夾心ELISA用于檢測PT的含量.方法 採用雜交瘤技術製備PT的單抗,併對其進行鑒定；優化ELISA繫統反應條件,建立PT雙抗體夾心ELISA定量檢測方法,併對其進行精密性及準確性驗證；應用建立的方法檢測武漢生物製品研究所有限責任公司(簡稱武漢公司)73批無細胞百日咳疫苗生產中間樣品中的PT含量.結果 穫得4株穩定的抗PT雜交瘤細胞株,抗體亞型均為IgG2a,抗體腹水ELISA效價達1∶106以上,均能與PT髮生特異反應,而與百日咳絲狀血凝素、白喉和破傷風類毒素未髮生交扠反應；建立的雙抗體夾心ELISA的線性檢測範圍在2.50～80.00 ng/mL之間,酶標闆內和闆間變異繫數均小于10％；PT的高、中、低濃度的迴收率分彆為97.41％、106.60％和89.98％；73批無細胞百日咳疫苗生產中間樣品中的PT質量濃度在50.00 ～ 150.00 ng/mL之間波動,說明中間產物的批間一緻性及穩定性趨勢良好.結論 已成功製備瞭抗PT的單抗,併建立瞭精密性和準確性均較好的定量檢測PT的雙抗體夾心ELISA,可用于無細胞百日咳疫苗生產中PT的定量檢測.
목적 제비백일해독소(Pertussis toxin,PT)적단극륭항체,병건립쌍항체협심ELISA용우검측PT적함량.방법 채용잡교류기술제비PT적단항,병대기진행감정；우화ELISA계통반응조건,건립PT쌍항체협심ELISA정량검측방법,병대기진행정밀성급준학성험증；응용건립적방법검측무한생물제품연구소유한책임공사(간칭무한공사)73비무세포백일해역묘생산중간양품중적PT함량.결과 획득4주은정적항PT잡교류세포주,항체아형균위IgG2a,항체복수ELISA효개체1∶106이상,균능여PT발생특이반응,이여백일해사상혈응소、백후화파상풍류독소미발생교차반응；건립적쌍항체협심ELISA적선성검측범위재2.50～80.00 ng/mL지간,매표판내화판간변이계수균소우10％；PT적고、중、저농도적회수솔분별위97.41％、106.60％화89.98％；73비무세포백일해역묘생산중간양품중적PT질량농도재50.00 ～ 150.00 ng/mL지간파동,설명중간산물적비간일치성급은정성추세량호.결론 이성공제비료항PT적단항,병건립료정밀성화준학성균교호적정량검측PT적쌍항체협심ELISA,가용우무세포백일해역묘생산중PT적정량검측.
