西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2013年
3期
308-312
,共5页
王宏芳%刘扬%李金华%吴嘉慧%李艳博%王志成%刘威武%龚守良
王宏芳%劉颺%李金華%吳嘉慧%李豔博%王誌成%劉威武%龔守良
왕굉방%류양%리금화%오가혜%리염박%왕지성%류위무%공수량
条件复制型腺病毒%人端粒酶逆转录酶%基因治疗%抗肿瘤
條件複製型腺病毒%人耑粒酶逆轉錄酶%基因治療%抗腫瘤
조건복제형선병독%인단립매역전록매%기인치료%항종류
目的 构建并包装以人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控E1A(CR2区缺失)蛋白表达的肿瘤细胞双重靶向条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAd),并探讨其对肿瘤细胞的抑制作用.方法 采用PCR技术扩增hTERT启动子序列,将其克隆至pShuttle-E1A-E1Bp-E1B55K载体(E1A基因CR2区缺失)中,构建重组腺病毒质粒,并转染HEK293细胞进行病毒包装,PCR鉴定;CCK-8法检测重组腺病毒(CRAd.p-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,简称CRAd.p)对肿瘤细胞的抑制作用.结果 hTERT启动子序列克隆正确;pShuttle-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K经Kpn Ⅰ单酶切可见1 542 bp和6 775 bp两条电泳带,PCR鉴定得到250、1 148 bp和298 bp基因片段;CRAd.p经PCR扩增得到250、1148 bp和298 bp基因片段,鉴定结果与预期完全相符;CRAd.p感染MCF-7、MDA-MB-231、HepG2和HTC-8细胞72 h后与各自对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);CRAd.p感染MDA-MB-231细胞后10～250 MOI组细胞吸光度值与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),随着感染时间延长,抑制作用越发明显.结论 成功获得对肿瘤细胞具有双重靶向和溶瘤作用的条件复制型腺病毒,为基因治疗的靶向性和有效性提供了可能.
目的 構建併包裝以人耑粒酶逆轉錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)啟動子調控E1A(CR2區缺失)蛋白錶達的腫瘤細胞雙重靶嚮條件複製型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAd),併探討其對腫瘤細胞的抑製作用.方法 採用PCR技術擴增hTERT啟動子序列,將其剋隆至pShuttle-E1A-E1Bp-E1B55K載體(E1A基因CR2區缺失)中,構建重組腺病毒質粒,併轉染HEK293細胞進行病毒包裝,PCR鑒定;CCK-8法檢測重組腺病毒(CRAd.p-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,簡稱CRAd.p)對腫瘤細胞的抑製作用.結果 hTERT啟動子序列剋隆正確;pShuttle-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K經Kpn Ⅰ單酶切可見1 542 bp和6 775 bp兩條電泳帶,PCR鑒定得到250、1 148 bp和298 bp基因片段;CRAd.p經PCR擴增得到250、1148 bp和298 bp基因片段,鑒定結果與預期完全相符;CRAd.p感染MCF-7、MDA-MB-231、HepG2和HTC-8細胞72 h後與各自對照組比較差異均有統計學意義(P＜0.01);CRAd.p感染MDA-MB-231細胞後10～250 MOI組細胞吸光度值與對照組比較差異均有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01),隨著感染時間延長,抑製作用越髮明顯.結論 成功穫得對腫瘤細胞具有雙重靶嚮和溶瘤作用的條件複製型腺病毒,為基因治療的靶嚮性和有效性提供瞭可能.
목적 구건병포장이인단립매역전록매(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)계동자조공E1A(CR2구결실)단백표체적종류세포쌍중파향조건복제형선병독(conditionally replicating adenovirus,CRAd),병탐토기대종류세포적억제작용.방법 채용PCR기술확증hTERT계동자서렬,장기극륭지pShuttle-E1A-E1Bp-E1B55K재체(E1A기인CR2구결실)중,구건중조선병독질립,병전염HEK293세포진행병독포장,PCR감정;CCK-8법검측중조선병독(CRAd.p-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,간칭CRAd.p)대종류세포적억제작용.결과 hTERT계동자서렬극륭정학;pShuttle-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K경Kpn Ⅰ단매절가견1 542 bp화6 775 bp량조전영대,PCR감정득도250、1 148 bp화298 bp기인편단;CRAd.p경PCR확증득도250、1148 bp화298 bp기인편단,감정결과여예기완전상부;CRAd.p감염MCF-7、MDA-MB-231、HepG2화HTC-8세포72 h후여각자대조조비교차이균유통계학의의(P＜0.01);CRAd.p감염MDA-MB-231세포후10～250 MOI조세포흡광도치여대조조비교차이균유통계학의의(P＜0.05혹P＜0.01),수착감염시간연장,억제작용월발명현.결론 성공획득대종류세포구유쌍중파향화용류작용적조건복제형선병독,위기인치료적파향성화유효성제공료가능.
