CAJ | 학술논문

本研究旨在对犬瘟热病毒(CDV)疫苗株H基因进行克隆及原核表达,并对产物的免疫原性做初步鉴定.根据犬瘟热病毒参考株Ondetstepoort的H基因序列,去除信号肽序列并选取其主要抗原表位设计引物,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段；产物克隆至表达载体pET28b并转化宿主菌RosettaTM,优化诱导表达条件,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE鉴定、Western blotting分析及间接酶联免疫吸附试验(ELISA)；并将纯化的H蛋白免疫小鼠,进行中和试验检测抗体效价.结果显示,PCR扩增得到1113 bp DNA片段；在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导条件下可获得较高水平的表达；经SDS-PAGE鉴定,表达的H蛋白分子质量为42.38 ku,与预期值相符；Western blotting显示,在42.38 ku出现特异性目的条带；ELISA结果显示,表达的H蛋白能被抗CDV抗体识别,但与正常血清未发生非特异性反应；中和试验结果表明,血清中和抗体效价约为2-3.3.结果提示,H蛋白获得了正确表达,对CDV抗血清具有特异反应性,可作为实时检测动物机体免疫状况检测的候选抗原,为进一步研制犬瘟热抗体检测ELISA试剂盒和新型疫苗奠定基础.
본연구지재대견온열병독(CDV)역묘주H기인진행극륭급원핵표체,병대산물적면역원성주초보감정.근거견온열병독삼고주Ondetstepoort적H기인서렬,거제신호태서렬병선취기주요항원표위설계인물,용반전록—취합매련식반응(RT-PCR)확증목적편단；산물극륭지표체재체pET28b병전화숙주균RosettaTM,우화유도표체조건,순화목적단백,병진행SDS-PAGE감정、Western blotting분석급간접매련면역흡부시험(ELISA)；병장순화적H단백면역소서,진행중화시험검측항체효개.결과현시,PCR확증득도1113 bp DNA편단；재37℃、1.0 mmol/L IPTG유도조건하가획득교고수평적표체；경SDS-PAGE감정,표체적H단백분자질량위42.38 ku,여예기치상부；Western blotting현시,재42.38 ku출현특이성목적조대；ELISA결과현시,표체적H단백능피항CDV항체식별,단여정상혈청미발생비특이성반응；중화시험결과표명,혈청중화항체효개약위2-3.3.결과제시,H단백획득료정학표체,대CDV항혈청구유특이반응성,가작위실시검측동물궤체면역상황검측적후선항원,위진일보연제견온열항체검측ELISA시제합화신형역묘전정기출.