CAJ | 학술논문

本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达MxA融合蛋白pET32a(+)-MxA,制备兔抗人MxA抗血清.采用PCR技术获得MxA基因,然后将MxA基因重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21 (DE3)培养物,纯化蛋白质后免疫新西兰兔制备抗血清.SDS-PAGE分析结果显示,pET32a(+)-MxA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达；获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6400；Western blotting检测结果显示,抗血清可与真核表达的MxA蛋白进行特异性结合.试验结果表明,在大肠杆菌中成功表达了pET32a(+)-MxA融合蛋白,制备了具有高度特异性的兔抗人MxA抗血清,这样为采用酶标法测定病毒患者全血细胞或由干扰素诱导的细胞产生的MxA蛋白质含量及临床诊断试剂盒的开发和应用打下了基础.
본시험지재이용대장간균BL21(DE3)표체MxA융합단백pET32a(+)-MxA,제비토항인MxA항혈청.채용PCR기술획득MxA기인,연후장MxA기인중조도pET32a(+)재체중,사선양성극륭,전화대장간균,IPTG유도표체,용초성파렬해중조균BL21 (DE3)배양물,순화단백질후면역신서란토제비항혈청.SDS-PAGE분석결과현시,pET32a(+)-MxA융합단백재대장간균BL21(DE3)균주중이포함체형식고효표체；획득적항혈청경간접ELISA법검측효개위1∶6400；Western blotting검측결과현시,항혈청가여진핵표체적MxA단백진행특이성결합.시험결과표명,재대장간균중성공표체료pET32a(+)-MxA융합단백,제비료구유고도특이성적토항인MxA항혈청,저양위채용매표법측정병독환자전혈세포혹유간우소유도적세포산생적MxA단백질함량급림상진단시제합적개발화응용타하료기출.