中华老年心脑血管病杂志
中華老年心腦血管病雜誌
중화노년심뇌혈관병잡지
CHINESE JOURNAL OF GERIATRIC CARDIOVASCULAR AND CEREBROVASCULAR DISEASES
2013年
5期
514-520
,共7页
邓海燕%曾俊义%魏云峰%王梦洪%郑泽琪%彭景添%张婉%文通%张玉崚
鄧海燕%曾俊義%魏雲峰%王夢洪%鄭澤琪%彭景添%張婉%文通%張玉崚
산해연%증준의%위운봉%왕몽홍%정택기%팽경첨%장완%문통%장옥릉
微RNAs%慢病毒属%间质干细胞%转染%肌钙蛋白I
微RNAs%慢病毒屬%間質榦細胞%轉染%肌鈣蛋白I
미RNAs%만병독속%간질간세포%전염%기개단백I
目的 通过微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSC),探讨miR-1对MSC向心肌细胞分化的影响.方法 采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠MSC并进行流式细胞学鉴定;构建表达miR-1慢病毒载体;将miR-1慢病毒载体转染大鼠MSC(MSCmiR-1)连续培养15 d,光镜下观察转染后细胞形态,分别于0、4、6、15 d qRT-PCR检测miR-1、心肌相关基因锌指结构蛋白(GATA-4)、肌钙蛋白I(cTnI)、α肌动蛋白(α-actin)的表达;免疫荧光观察cTnI的表达;Western blot检测α-actin的表达.结果 原代大鼠MSC呈长梭形、漩涡状生长,流式细胞学检测显示,98%以上细胞表达CD44和CD29,不足1%细胞表达CD45;成功构建miR-1重组慢病毒载体,病毒滴度为3×108 TU/μl;转导miR-1后,MSCmiR-1高表达心肌特异性相关基因GATA-4、α-actin、cTnI,并随时间逐渐增强,转染4 d免疫荧光检测可见cTnI在部分MSCmiR-1中表达,于15 d时表达最强,Western blot进一步证实了α-actin在MSCmiR-1中表达.结论 转导miR-1至大鼠MSC中可促使其向心肌样细胞的分化.
目的 通過微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)慢病毒載體轉染大鼠骨髓間充質榦細胞(MSC),探討miR-1對MSC嚮心肌細胞分化的影響.方法 採用全骨髓貼壁培養法分離培養大鼠MSC併進行流式細胞學鑒定;構建錶達miR-1慢病毒載體;將miR-1慢病毒載體轉染大鼠MSC(MSCmiR-1)連續培養15 d,光鏡下觀察轉染後細胞形態,分彆于0、4、6、15 d qRT-PCR檢測miR-1、心肌相關基因鋅指結構蛋白(GATA-4)、肌鈣蛋白I(cTnI)、α肌動蛋白(α-actin)的錶達;免疫熒光觀察cTnI的錶達;Western blot檢測α-actin的錶達.結果 原代大鼠MSC呈長梭形、漩渦狀生長,流式細胞學檢測顯示,98%以上細胞錶達CD44和CD29,不足1%細胞錶達CD45;成功構建miR-1重組慢病毒載體,病毒滴度為3×108 TU/μl;轉導miR-1後,MSCmiR-1高錶達心肌特異性相關基因GATA-4、α-actin、cTnI,併隨時間逐漸增彊,轉染4 d免疫熒光檢測可見cTnI在部分MSCmiR-1中錶達,于15 d時錶達最彊,Western blot進一步證實瞭α-actin在MSCmiR-1中錶達.結論 轉導miR-1至大鼠MSC中可促使其嚮心肌樣細胞的分化.
목적 통과미소RNA-1(microRNA-1,miR-1)만병독재체전염대서골수간충질간세포(MSC),탐토miR-1대MSC향심기세포분화적영향.방법 채용전골수첩벽배양법분리배양대서MSC병진행류식세포학감정;구건표체miR-1만병독재체;장miR-1만병독재체전염대서MSC(MSCmiR-1)련속배양15 d,광경하관찰전염후세포형태,분별우0、4、6、15 d qRT-PCR검측miR-1、심기상관기인자지결구단백(GATA-4)、기개단백I(cTnI)、α기동단백(α-actin)적표체;면역형광관찰cTnI적표체;Western blot검측α-actin적표체.결과 원대대서MSC정장사형、선와상생장,류식세포학검측현시,98%이상세포표체CD44화CD29,불족1%세포표체CD45;성공구건miR-1중조만병독재체,병독적도위3×108 TU/μl;전도miR-1후,MSCmiR-1고표체심기특이성상관기인GATA-4、α-actin、cTnI,병수시간축점증강,전염4 d면역형광검측가견cTnI재부분MSCmiR-1중표체,우15 d시표체최강,Western blot진일보증실료α-actin재MSCmiR-1중표체.결론 전도miR-1지대서MSC중가촉사기향심기양세포적분화.
