中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2012年
3期
36-43
,共8页
秦培兰%李艳%米荣升%呼高伟%黄燕%周鹏%张国恩%苏庆美%曹薇
秦培蘭%李豔%米榮升%呼高偉%黃燕%週鵬%張國恩%囌慶美%曹薇
진배란%리염%미영승%호고위%황연%주붕%장국은%소경미%조미
微小隐孢子虫%抗原表位%重叠延伸PCR%原核表达%抗原性
微小隱孢子蟲%抗原錶位%重疊延伸PCR%原覈錶達%抗原性
미소은포자충%항원표위%중첩연신PCR%원핵표체%항원성
应用多个抗原袁位预测软件对微小隐孢子虫CP15、P23和CP15/60三个子孢子表面抗原的氨基酸序列进行T细胞袁位预测及分析,从中选取了三个抗原表位富集的基因片段,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)将该三个基因片段串联在一起,各基因片段之间以柔性氨基酸(GGGGS)碱基序列链接,得到的拼接片段命名为CpTm.将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pET-CpTm,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.结果成功地构建了CpTm串联基因并在大肠杆菌中以可溶形式高效表达,质谱分析表明重组表达蛋白包含了上述三个抗原的氨基酸序列.Western blot分析显示该重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清及隐孢子虫鼠基因型CP15、P23、CP15/60基因重组表达蛋白免疫兔血清识别,制备的抗血清能被重组蛋白特异性识别,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为多表位疫苗的研制奠定了基础.
應用多箇抗原袁位預測軟件對微小隱孢子蟲CP15、P23和CP15/60三箇子孢子錶麵抗原的氨基痠序列進行T細胞袁位預測及分析,從中選取瞭三箇抗原錶位富集的基因片段,利用重疊延伸PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)將該三箇基因片段串聯在一起,各基因片段之間以柔性氨基痠(GGGGS)堿基序列鏈接,得到的拼接片段命名為CpTm.將目的基因剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)上,構建重組錶達質粒pET-CpTm,併轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導錶達,將純化的重組蛋白免疫BALB/c小鼠製備多剋隆抗體.結果成功地構建瞭CpTm串聯基因併在大腸桿菌中以可溶形式高效錶達,質譜分析錶明重組錶達蛋白包含瞭上述三箇抗原的氨基痠序列.Western blot分析顯示該重組蛋白能被牛抗微小隱孢子蟲暘性血清及隱孢子蟲鼠基因型CP15、P23、CP15/60基因重組錶達蛋白免疫兔血清識彆,製備的抗血清能被重組蛋白特異性識彆,錶明錶達的重組蛋白具有較好的反應原性和免疫原性,為多錶位疫苗的研製奠定瞭基礎.
응용다개항원원위예측연건대미소은포자충CP15、P23화CP15/60삼개자포자표면항원적안기산서렬진행T세포원위예측급분석,종중선취료삼개항원표위부집적기인편단,이용중첩연신PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)장해삼개기인편단천련재일기,각기인편단지간이유성안기산(GGGGS)감기서렬련접,득도적병접편단명명위CpTm.장목적기인극륭도원핵표체재체pET-28a(+)상,구건중조표체질립pET-CpTm,병전화도대장간균BL21(DE3)중진행유도표체,장순화적중조단백면역BALB/c소서제비다극륭항체.결과성공지구건료CpTm천련기인병재대장간균중이가용형식고효표체,질보분석표명중조표체단백포함료상술삼개항원적안기산서렬.Western blot분석현시해중조단백능피우항미소은포자충양성혈청급은포자충서기인형CP15、P23、CP15/60기인중조표체단백면역토혈청식별,제비적항혈청능피중조단백특이성식별,표명표체적중조단백구유교호적반응원성화면역원성,위다표위역묘적연제전정료기출.
