中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2012年
4期
45-51
,共7页
李莹%李运燕%徐瑞敏%苑纯秀%杨健美%林矫矫%李利珍%冯新港
李瑩%李運燕%徐瑞敏%苑純秀%楊健美%林矯矯%李利珍%馮新港
리형%리운연%서서민%원순수%양건미%림교교%리리진%풍신항
日本血吸虫%钙网织蛋白%Sf9昆虫细胞%树突状细胞
日本血吸蟲%鈣網織蛋白%Sf9昆蟲細胞%樹突狀細胞
일본혈흡충%개망직단백%Sf9곤충세포%수돌상세포
为获得在Sf9昆虫细胞中表达的日本血吸虫钙网织蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,SjCRT)并分析其活化小鼠骨髓来源树突状细胞的功能,将构建的重组杆状病毒转移载体pFastBacHTA-SjCRT转入DH 10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-SjCRT,再转染到Sf9昆虫细胞,进行重组蛋白的表达.用Westem blot和间接免疫荧光对表达蛋白进行鉴定.His柱亲和层析法纯化表达的蛋白,Westen blot鉴定纯化后的蛋白.从BALB/c小鼠产生骨髓来源的树突细胞mDCs,用纯化的重组SjCRT蛋白与mDCs共培养,流式细胞术检测mDCs细胞的表面分子MHCⅡ、CD40和CD86的表达.结果显示,在Sf9昆虫细胞中成功表达了SjCRT蛋白；纯化后的重组SjCRT蛋白既能被感染日本血吸虫42 d的兔阳性血清识别,也能被原核表达的重组SJC RT蛋白免疫鼠的血清所识别.流式细胞术结果显示,与对照组的相比,SjCRT蛋白刺激组mDCs细胞表面分子MHCⅡ和CD86的表达量显著增强(P＜0.05).可见,在Sf9昆虫细胞中表达的SjCRT蛋白能刺激小鼠骨髓来源树突细胞表型的成熟.
為穫得在Sf9昆蟲細胞中錶達的日本血吸蟲鈣網織蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,SjCRT)併分析其活化小鼠骨髓來源樹突狀細胞的功能,將構建的重組桿狀病毒轉移載體pFastBacHTA-SjCRT轉入DH 10Bac細胞,得到重組穿梭質粒reBacmid-SjCRT,再轉染到Sf9昆蟲細胞,進行重組蛋白的錶達.用Westem blot和間接免疫熒光對錶達蛋白進行鑒定.His柱親和層析法純化錶達的蛋白,Westen blot鑒定純化後的蛋白.從BALB/c小鼠產生骨髓來源的樹突細胞mDCs,用純化的重組SjCRT蛋白與mDCs共培養,流式細胞術檢測mDCs細胞的錶麵分子MHCⅡ、CD40和CD86的錶達.結果顯示,在Sf9昆蟲細胞中成功錶達瞭SjCRT蛋白；純化後的重組SjCRT蛋白既能被感染日本血吸蟲42 d的兔暘性血清識彆,也能被原覈錶達的重組SJC RT蛋白免疫鼠的血清所識彆.流式細胞術結果顯示,與對照組的相比,SjCRT蛋白刺激組mDCs細胞錶麵分子MHCⅡ和CD86的錶達量顯著增彊(P＜0.05).可見,在Sf9昆蟲細胞中錶達的SjCRT蛋白能刺激小鼠骨髓來源樹突細胞錶型的成熟.
위획득재Sf9곤충세포중표체적일본혈흡충개망직단백(Schistosoma japonicum calreticulin protein,SjCRT)병분석기활화소서골수래원수돌상세포적공능,장구건적중조간상병독전이재체pFastBacHTA-SjCRT전입DH 10Bac세포,득도중조천사질립reBacmid-SjCRT,재전염도Sf9곤충세포,진행중조단백적표체.용Westem blot화간접면역형광대표체단백진행감정.His주친화층석법순화표체적단백,Westen blot감정순화후적단백.종BALB/c소서산생골수래원적수돌세포mDCs,용순화적중조SjCRT단백여mDCs공배양,류식세포술검측mDCs세포적표면분자MHCⅡ、CD40화CD86적표체.결과현시,재Sf9곤충세포중성공표체료SjCRT단백；순화후적중조SjCRT단백기능피감염일본혈흡충42 d적토양성혈청식별,야능피원핵표체적중조SJC RT단백면역서적혈청소식별.류식세포술결과현시,여대조조적상비,SjCRT단백자격조mDCs세포표면분자MHCⅡ화CD86적표체량현저증강(P＜0.05).가견,재Sf9곤충세포중표체적SjCRT단백능자격소서골수래원수돌세포표형적성숙.
