华东师范大学学报（自然科学版）
華東師範大學學報（自然科學版）
화동사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF EAST CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2012年
4期
67-74
,共8页
α-N-乙酰半乳糖胺酶%重组蛋白%蛋白纯化%ELISA方法
α-N-乙酰半乳糖胺酶%重組蛋白%蛋白純化%ELISA方法
α-N-을선반유당알매%중조단백%단백순화%ELISA방법
为了建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法,实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA,以此为模板PCR扩增出α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体,转化B121表达菌株进行蛋白表达,使用亲和层析方法纯化His-A4酶,选择显色底物验证酶活性,同时,改进了传统的ELISA方法,直接将红细胞膜包被于ELISA检测平板中,以红细胞膜表面抗原作为直接底物,用ELISA方法检测酶活性.此研究建立了新型ELISA实验方法,以此方法验证了A4酶的活性,证明了此酶能够有效降低红细胞表面抗原抗体反应,且具有浓度和时间依赖性.
為瞭建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的篩選、檢測方法,實驗中提取腦膜金黃桿菌的基因組DNA,以此為模闆PCR擴增齣α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).將A4剋隆至pET-24a載體,轉化B121錶達菌株進行蛋白錶達,使用親和層析方法純化His-A4酶,選擇顯色底物驗證酶活性,同時,改進瞭傳統的ELISA方法,直接將紅細胞膜包被于ELISA檢測平闆中,以紅細胞膜錶麵抗原作為直接底物,用ELISA方法檢測酶活性.此研究建立瞭新型ELISA實驗方法,以此方法驗證瞭A4酶的活性,證明瞭此酶能夠有效降低紅細胞錶麵抗原抗體反應,且具有濃度和時間依賴性.
위료건립신형α-N-을선반유당알매적사선、검측방법,실험중제취뇌막금황간균적기인조DNA,이차위모판PCR확증출α-N-을선반유당알매(A4).장A4극륭지pET-24a재체,전화B121표체균주진행단백표체,사용친화층석방법순화His-A4매,선택현색저물험증매활성,동시,개진료전통적ELISA방법,직접장홍세포막포피우ELISA검측평판중,이홍세포막표면항원작위직접저물,용ELISA방법검측매활성.차연구건립료신형ELISA실험방법,이차방법험증료A4매적활성,증명료차매능구유효강저홍세포표면항원항체반응,차구유농도화시간의뢰성.
