华东师范大学学报（自然科学版）
華東師範大學學報（自然科學版）
화동사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF EAST CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2012年
5期
45-53,84
,共10页
祝静静%鲍秋颖%王宇萌%夏钢
祝靜靜%鮑鞦穎%王宇萌%夏鋼
축정정%포추영%왕우맹%하강
萤火虫萤光素酶%蛋白表达%蛋白纯化%细胞活性
螢火蟲螢光素酶%蛋白錶達%蛋白純化%細胞活性
형화충형광소매%단백표체%단백순화%세포활성
运用PCR的方法,从萤火虫萤光素酶基因载体pGL4.26扩增萤火虫萤光素酶基因片段,将其插入连接于原核表达载体pET24a中,构建重组表达载体pET24a-Luc.经酶切鉴定及序列分析后,将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌BL21( DE3)中,获得阳性重组菌BL21/pET24a-Luc.IPTG诱导蛋白高效表达并通过镍柱亲和层析纯化萤火虫萤光素酶.该目的蛋白活性用Bright-GloTM试剂进行验证并用于建立一种基于测量ATP含量的检测细胞生物活性的方法.与传统的细胞生物活性检测试剂盒MTT,CCK-8以及Alamar Blue比较,该方法具有反应迅速、活力高、灵敏度好、生产方便的优点,具有实际应用的潜力.
運用PCR的方法,從螢火蟲螢光素酶基因載體pGL4.26擴增螢火蟲螢光素酶基因片段,將其插入連接于原覈錶達載體pET24a中,構建重組錶達載體pET24a-Luc.經酶切鑒定及序列分析後,將重組載體轉化到錶達菌株大腸桿菌BL21( DE3)中,穫得暘性重組菌BL21/pET24a-Luc.IPTG誘導蛋白高效錶達併通過鎳柱親和層析純化螢火蟲螢光素酶.該目的蛋白活性用Bright-GloTM試劑進行驗證併用于建立一種基于測量ATP含量的檢測細胞生物活性的方法.與傳統的細胞生物活性檢測試劑盒MTT,CCK-8以及Alamar Blue比較,該方法具有反應迅速、活力高、靈敏度好、生產方便的優點,具有實際應用的潛力.
운용PCR적방법,종형화충형광소매기인재체pGL4.26확증형화충형광소매기인편단,장기삽입련접우원핵표체재체pET24a중,구건중조표체재체pET24a-Luc.경매절감정급서렬분석후,장중조재체전화도표체균주대장간균BL21( DE3)중,획득양성중조균BL21/pET24a-Luc.IPTG유도단백고효표체병통과얼주친화층석순화형화충형광소매.해목적단백활성용Bright-GloTM시제진행험증병용우건립일충기우측량ATP함량적검측세포생물활성적방법.여전통적세포생물활성검측시제합MTT,CCK-8이급Alamar Blue비교,해방법구유반응신속、활력고、령민도호、생산방편적우점,구유실제응용적잠력.
