工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2013年
1期
36-40
,共5页
沈锦城%张泽华%杨穗珊%张添元%罗进贤%张爱联
瀋錦城%張澤華%楊穗珊%張添元%囉進賢%張愛聯
침금성%장택화%양수산%장첨원%라진현%장애련
漆酶%枯草芽孢杆菌%基因表达%P.pastoris%发酵%高密度发酵
漆酶%枯草芽孢桿菌%基因錶達%P.pastoris%髮酵%高密度髮酵
칠매%고초아포간균%기인표체%P.pastoris%발효%고밀도발효
用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2.构建表达质粒pPIC9K-lac2.通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2).在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白.在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基.在发酵的第一阶段连续24 h补加50％甘油-0.8％ PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8％ PTM4诱导49 h.在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20％ ～30％,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A600=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液.
用PCR法擴增枯草芽孢桿菌的漆酶基因lac2.構建錶達質粒pPIC9K-lac2.通過電轉法將lac2基因重組于P.pastoris基因組,篩選高G418抗性和高錶達漆酶的轉化子作為工程菌GS115(pPIC9K-lac2).在髮酵罐中髮酵GS115(pPIC9K-lac2)錶達重組蛋白.在50 L髮酵罐中加入20 L無機鹽髮酵培養基.在髮酵的第一階段連續24 h補加50％甘油-0.8％ PTM4增殖P.pastoris,然後用甲醇-0.8％ PTM4誘導49 h.在髮酵過程中,通過調節攪拌的頻率和通氣量,將溶氧維持于20％ ～30％,用氨水維持pH 5.0.放罐時生物量為A600=266.5,錶達漆酶1097.5U/L髮酵液.
용PCR법확증고초아포간균적칠매기인lac2.구건표체질립pPIC9K-lac2.통과전전법장lac2기인중조우P.pastoris기인조,사선고G418항성화고표체칠매적전화자작위공정균GS115(pPIC9K-lac2).재발효관중발효GS115(pPIC9K-lac2)표체중조단백.재50 L발효관중가입20 L무궤염발효배양기.재발효적제일계단련속24 h보가50％감유-0.8％ PTM4증식P.pastoris,연후용갑순-0.8％ PTM4유도49 h.재발효과정중,통과조절교반적빈솔화통기량,장용양유지우20％ ～30％,용안수유지pH 5.0.방관시생물량위A600=266.5,표체칠매1097.5U/L발효액.
