CAJ | 학술논문

目的:建立荧光显微镜快速筛选对血小板生成素受体(Mpl)基因RNA干扰片段的方法.方法:通过体外重组技术将Mpl与绿色荧光蛋白(GFP)构建成融合基因,克隆进pDs载体中产生pDs-Mpl-GFP载体,将人U6启动子及5个Mpl shRNA发夹结构(shMpl-A,shMpl-B,shMpl-C,shMpl-D,shMpl-E)分别克隆至pDs-Mpl-GFP真核载体中,构建出针对Mpl 5个不同位点的RNA干扰载体,然后将获得的上述干扰载体通过脂质体方法转染至293T细胞中,用荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数,判定构建的RNA干扰载体对靶基因RNA的干扰效果.结果:构建的5个干扰载体都能对转染的293T细胞中的Mpl-GFP融合基因进行有效的基因敲减作用,在pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A、pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-B与pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-E的干扰作用下,293T细胞中的荧光强度及发荧光细胞数目变得更少和更弱,干扰效果较好,而其它两个效果较差；在这三个较好的干扰载体中,pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A的干扰效果最好.结论:成功构建Mpl基因的真核RNA干扰载体,并筛选出有效的RNA干扰片段.
목적:건립형광현미경쾌속사선대혈소판생성소수체(Mpl)기인RNA간우편단적방법.방법:통과체외중조기술장Mpl여록색형광단백(GFP)구건성융합기인,극륭진pDs재체중산생pDs-Mpl-GFP재체,장인U6계동자급5개Mpl shRNA발협결구(shMpl-A,shMpl-B,shMpl-C,shMpl-D,shMpl-E)분별극륭지pDs-Mpl-GFP진핵재체중,구건출침대Mpl 5개불동위점적RNA간우재체,연후장획득적상술간우재체통과지질체방법전염지293T세포중,용형광현미경관찰293T세포적형광발광강도급형광세포수,판정구건적RNA간우재체대파기인RNA적간우효과.결과:구건적5개간우재체도능대전염적293T세포중적Mpl-GFP융합기인진행유효적기인고감작용,재pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A、pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-B여pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-E적간우작용하,293T세포중적형광강도급발형광세포수목변득경소화경약,간우효과교호,이기타량개효과교차；재저삼개교호적간우재체중,pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A적간우효과최호.결론:성공구건Mpl기인적진핵RNA간우재체,병사선출유효적RNA간우편단.