CAJ | 학술논문

构建新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的原核表达载体,并将其在宿主菌E.coli BL21 (DE3)感受态细胞中表达.以NDV La Sota株NP基因序列为模板,设计特异性引物,通过PCR扩增获得NP蛋白全长基因片段,定向插入原核表达载体pET-30a,构建重组质粒pET-NDV NP；将构建的重组质粒转化宿主菌E.coli BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,表达出目的蛋白,并采用亲和层析的方法纯化表达蛋白；表达蛋白采用Western blotting方法检测其反应原性.结果显示,成功克隆了新城疫病毒NP基因全长,片段序列1470 bp;构建的pET-NDV NP载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误；转化表达宿主菌后经SDS-PAGE检测结果显示目的基因得到成功表达,且表达蛋白经Ni-NTA镍离子亲和层析法被成功纯化,蛋白质浓度为3 mg/mL;Western blotting检测结果显示表达蛋白具有良好的反应原性.试验结果表明,成功构建了含有新城疫病毒核衣壳蛋白基因的原核表达载体,成功表达、纯化得到了NDV NP蛋白.
구건신성역병독(Newcastle disease virus,NDV)핵의각단백(nucleocapsid protein,NP)기인적원핵표체재체,병장기재숙주균E.coli BL21 (DE3)감수태세포중표체.이NDV La Sota주NP기인서렬위모판,설계특이성인물,통과PCR확증획득NP단백전장기인편단,정향삽입원핵표체재체pET-30a,구건중조질립pET-NDV NP；장구건적중조질립전화숙주균E.coli BL21 (DE3)감수태세포,경IPTG유도,표체출목적단백,병채용친화층석적방법순화표체단백；표체단백채용Western blotting방법검측기반응원성.결과현시,성공극륭료신성역병독NP기인전장,편단서렬1470 bp;구건적pET-NDV NP재체경PCR、쌍매절、측서감정균무오；전화표체숙주균후경SDS-PAGE검측결과현시목적기인득도성공표체,차표체단백경Ni-NTA얼리자친화층석법피성공순화,단백질농도위3 mg/mL;Western blotting검측결과현시표체단백구유량호적반응원성.시험결과표명,성공구건료함유신성역병독핵의각단백기인적원핵표체재체,성공표체、순화득도료NDV NP단백.