动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2013年
3期
68-71
,共4页
微小隐孢子虫%LCCL结构域基因%克隆%原核表达
微小隱孢子蟲%LCCL結構域基因%剋隆%原覈錶達
미소은포자충%LCCL결구역기인%극륭%원핵표체
为探讨微小隐孢子虫的入侵机制,克隆、表达了微小隐孢子虫LCCL结构域基因.从已构建的微小隐孢子虫cDNA文库中,采用PCR随机扩增LCCL结构域基因.与Pmd-18-T载体连接后,挑取阳性重组子测序分析.用基因重组技术将LCCL结构域基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建LCCL结构域基因的重组原核表达载体pGEX-4T-1-LCCL.重组质粒经酶切、测序鉴定后转入大肠埃希菌BL21中,IPTG诱导表达目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.最终得到了在大肠埃希菌中高效表达的重组蛋白,分子质量大小约为37 ku,并且具有反应原性,为进一步研究微小隐孢子虫的入侵机制奠定了基础.
為探討微小隱孢子蟲的入侵機製,剋隆、錶達瞭微小隱孢子蟲LCCL結構域基因.從已構建的微小隱孢子蟲cDNA文庫中,採用PCR隨機擴增LCCL結構域基因.與Pmd-18-T載體連接後,挑取暘性重組子測序分析.用基因重組技術將LCCL結構域基因剋隆入原覈錶達載體pGEX-4T-1中,構建LCCL結構域基因的重組原覈錶達載體pGEX-4T-1-LCCL.重組質粒經酶切、測序鑒定後轉入大腸埃希菌BL21中,IPTG誘導錶達目的蛋白,併用SDS-PAGE和Western blot進行鑒定.最終得到瞭在大腸埃希菌中高效錶達的重組蛋白,分子質量大小約為37 ku,併且具有反應原性,為進一步研究微小隱孢子蟲的入侵機製奠定瞭基礎.
위탐토미소은포자충적입침궤제,극륭、표체료미소은포자충LCCL결구역기인.종이구건적미소은포자충cDNA문고중,채용PCR수궤확증LCCL결구역기인.여Pmd-18-T재체련접후,도취양성중조자측서분석.용기인중조기술장LCCL결구역기인극륭입원핵표체재체pGEX-4T-1중,구건LCCL결구역기인적중조원핵표체재체pGEX-4T-1-LCCL.중조질립경매절、측서감정후전입대장애희균BL21중,IPTG유도표체목적단백,병용SDS-PAGE화Western blot진행감정.최종득도료재대장애희균중고효표체적중조단백,분자질량대소약위37 ku,병차구유반응원성,위진일보연구미소은포자충적입침궤제전정료기출.
