CAJ | 학술논문

为获得猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白抗原表位集中区原核重组目的蛋白,建立CSFV抗原和抗体快速检测方法.通过扩增CSFV E2蛋白抗原表位集中区基因,亚克隆至表达载pET-30a(+),构建重组原核表达载体pET-30a-E2-1,转化至宿主菌Rostta(DE3)后进行诱导表达.SDS-PAGE分析显示,出现与目的蛋白大小一致的蛋白条带,分子质量大小为31 ku.对重组蛋白表达条件进行优化,最终获得其诱导表达的最佳温度为18℃,最佳IPTG浓度为0.1 mmol/L.目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白含量的46％.Western blot分析显示,目的蛋白不仅能与兔抗CSFV高免血清反应,还可以与载体特异性标签His单抗反应,表明融合蛋白具有良好的抗原性,为CSFV抗原和抗体检测试剂盒的研制奠定了基础.
위획득저온병독(CSFV)E2단백항원표위집중구원핵중조목적단백,건립CSFV항원화항체쾌속검측방법.통과확증CSFV E2단백항원표위집중구기인,아극륭지표체재pET-30a(+),구건중조원핵표체재체pET-30a-E2-1,전화지숙주균Rostta(DE3)후진행유도표체.SDS-PAGE분석현시,출현여목적단백대소일치적단백조대,분자질량대소위31 ku.대중조단백표체조건진행우화,최종획득기유도표체적최가온도위18℃,최가IPTG농도위0.1 mmol/L.목적단백이포함체형식존재,기표체량약점균체총단백함량적46％.Western blot분석현시,목적단백불부능여토항CSFV고면혈청반응,환가이여재체특이성표첨His단항반응,표명융합단백구유량호적항원성,위CSFV항원화항체검측시제합적연제전정료기출.