畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
2期
316-321
,共6页
任卫青%张志平%许晓婷%邓立新%李小佳%吕婧玉%翟明胜%王新庄
任衛青%張誌平%許曉婷%鄧立新%李小佳%呂婧玉%翟明勝%王新莊
임위청%장지평%허효정%산립신%리소가%려청옥%적명성%왕신장
胚胎干细胞%饲养层%培养液%优化%小鼠
胚胎榦細胞%飼養層%培養液%優化%小鼠
배태간세포%사양층%배양액%우화%소서
为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化.将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+ 15％ KSR+ LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF十胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响.结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P＜0.05).囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P＜0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P＜0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率.所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点.由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养.
為瞭更高效地分離昆明小鼠胚胎榦細胞,本研究從飼養層、胚胎髮育階段和培養液方麵進行優化.將3代以內的小鼠胎兒成纖維細胞(MEF)用絲裂黴素C處理後,分彆按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接種,以H-DMEM+ 15％ KSR+ LIF為培養液,觀察不同密度飼養層對昆明小鼠胚胎榦細胞(ES細胞)生長的影響,併研究胚胎髮育階段和培養液中分彆添加榦細胞生長因子(SCF)、SCF十胰島素對昆明小鼠ES細胞分離剋隆的影響.結果顯示,胚胎在密度為1×105·mL-1的飼養層上,F1代和F2代ES細胞剋隆形成率均顯著高于其他2組(P＜0.05).囊胚的F2代ES細胞剋隆形成率顯著高于桑椹胚(P＜0.05),培養液中添加SCF顯著提高昆明小鼠胚胎貼壁率(P＜0.05),同時添加SCF和胰島素得到昆明小鼠最高胚胎貼壁率及F1、F2代ES細胞剋隆形成率.所分離的ES細胞顯示AKP染色彊暘性,Oct-4、SSEA-1的免疫熒光檢測暘性,具有ES細胞的特點.由此認為,髮育至囊胚的胚胎在MEF密度為1×105·mL-1上,培養液中同時添加SCF和胰島素更適閤昆明小鼠ES細胞的分離培養.
위료경고효지분리곤명소서배태간세포,본연구종사양층、배태발육계단화배양액방면진행우화.장3대이내적소서태인성섬유세포(MEF)용사렬매소C처리후,분별안1×104、1×105、1×106·mL-1밀도접충,이H-DMEM+ 15％ KSR+ LIF위배양액,관찰불동밀도사양층대곤명소서배태간세포(ES세포)생장적영향,병연구배태발육계단화배양액중분별첨가간세포생장인자(SCF)、SCF십이도소대곤명소서ES세포분리극륭적영향.결과현시,배태재밀도위1×105·mL-1적사양층상,F1대화F2대ES세포극륭형성솔균현저고우기타2조(P＜0.05).낭배적F2대ES세포극륭형성솔현저고우상심배(P＜0.05),배양액중첨가SCF현저제고곤명소서배태첩벽솔(P＜0.05),동시첨가SCF화이도소득도곤명소서최고배태첩벽솔급F1、F2대ES세포극륭형성솔.소분리적ES세포현시AKP염색강양성,Oct-4、SSEA-1적면역형광검측양성,구유ES세포적특점.유차인위,발육지낭배적배태재MEF밀도위1×105·mL-1상,배양액중동시첨가SCF화이도소경괄합곤명소서ES세포적분리배양.
