畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
2期
220-227
,共8页
赵一萍%白东义%李蓓%黄金龙%张宇宏%芒来
趙一萍%白東義%李蓓%黃金龍%張宇宏%芒來
조일평%백동의%리배%황금룡%장우굉%망래
马%Toll样受体%骨髓%SYBR Green Ⅰ%荧光定量RT-PCR
馬%Toll樣受體%骨髓%SYBR Green Ⅰ%熒光定量RT-PCR
마%Toll양수체%골수%SYBR Green Ⅰ%형광정량RT-PCR
旨在建立一种检测马Toll样受体(TLRs) mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR(Rverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)方法.参照GenBank中马TLRs的基因序列保守区设计特异性引物,以马β肌动蛋白(β-actin) mRNA为内参,建立荧光定量RT-PCR方法.结果,扩增曲线在1×102～1×108 copies·μL-1范围内有很好的线性关系,扩增相关系数在0.990以上,扩增效率在1.0左右.熔解曲线分析表明,产物为特异单峰,无引物二聚体,具有较高的特异性和灵敏度.重复性结果表明,该方法的组内、组间变异系数均小于3.50％,重复性较好.临床样品检测结果表明,TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8和TLR9在骨髓中均有表达,其中TLR4 mRNA表达水平最高,TLR9 mRNA表达水平最低.本研究建立的检测方法能够成功用于临床样品的检测,为研究马匹TLRs在mRNA水平的定量分析提供技术平台.
旨在建立一種檢測馬Toll樣受體(TLRs) mRNA錶達水平的SYBR Green Ⅰ熒光定量RT-PCR(Rverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)方法.參照GenBank中馬TLRs的基因序列保守區設計特異性引物,以馬β肌動蛋白(β-actin) mRNA為內參,建立熒光定量RT-PCR方法.結果,擴增麯線在1×102～1×108 copies·μL-1範圍內有很好的線性關繫,擴增相關繫數在0.990以上,擴增效率在1.0左右.鎔解麯線分析錶明,產物為特異單峰,無引物二聚體,具有較高的特異性和靈敏度.重複性結果錶明,該方法的組內、組間變異繫數均小于3.50％,重複性較好.臨床樣品檢測結果錶明,TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8和TLR9在骨髓中均有錶達,其中TLR4 mRNA錶達水平最高,TLR9 mRNA錶達水平最低.本研究建立的檢測方法能夠成功用于臨床樣品的檢測,為研究馬匹TLRs在mRNA水平的定量分析提供技術平檯.
지재건립일충검측마Toll양수체(TLRs) mRNA표체수평적SYBR Green Ⅰ형광정량RT-PCR(Rverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)방법.삼조GenBank중마TLRs적기인서렬보수구설계특이성인물,이마β기동단백(β-actin) mRNA위내삼,건립형광정량RT-PCR방법.결과,확증곡선재1×102～1×108 copies·μL-1범위내유흔호적선성관계,확증상관계수재0.990이상,확증효솔재1.0좌우.용해곡선분석표명,산물위특이단봉,무인물이취체,구유교고적특이성화령민도.중복성결과표명,해방법적조내、조간변이계수균소우3.50％,중복성교호.림상양품검측결과표명,TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8화TLR9재골수중균유표체,기중TLR4 mRNA표체수평최고,TLR9 mRNA표체수평최저.본연구건립적검측방법능구성공용우림상양품적검측,위연구마필TLRs재mRNA수평적정량분석제공기술평태.
