口腔生物医学
口腔生物醫學
구강생물의학
ORAL BIOMEDICINE
2013年
1期
8-10
,共3页
欧伟%刘玉%孙卫斌%杨建良%Xuebin Yang%David Wood
歐偉%劉玉%孫衛斌%楊建良%Xuebin Yang%David Wood
구위%류옥%손위빈%양건량%Xuebin Yang%David Wood
牙骨质蛋白1%真核表达载体%酵母
牙骨質蛋白1%真覈錶達載體%酵母
아골질단백1%진핵표체재체%효모
目的:构建含人重组牙骨质蛋白1(recombination human cementum protein 1,rhCEMP1)基因的真核表达载体,观察其在酿酒酵母细胞中的表达.方法:采用PCR方法扩增rhCEMP1基因,利用定向克隆技术将rhCEMP1基因插入到中间载体pTeasy中,再进一步转插入载体pWX530.重组的pWX530-rhCEMP1在大肠杆菌DH5α中扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定所构建的质粒.经鉴定正确的表达载体pWX530-rhCEMP1转入酵母感受态细胞中,酵母经氨基酸营养缺陷型筛选后培养表达.利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和酶联免疫吸附测定(ELISA)分析蛋白表达情况,离子交换层析提纯蛋白.结果:构建的重组质粒成功转入酵母细胞,通过SDS-PAGE和ELISA检测rhCEMP1表达成功.结论:成功构建的含rhCEMP1基因的真核表达载体pWX530-rhCEMP1,并能转入酵母细胞中成功表达.
目的:構建含人重組牙骨質蛋白1(recombination human cementum protein 1,rhCEMP1)基因的真覈錶達載體,觀察其在釀酒酵母細胞中的錶達.方法:採用PCR方法擴增rhCEMP1基因,利用定嚮剋隆技術將rhCEMP1基因插入到中間載體pTeasy中,再進一步轉插入載體pWX530.重組的pWX530-rhCEMP1在大腸桿菌DH5α中擴增後,通過酶切電泳鑒定和DNA序列測定所構建的質粒.經鑒定正確的錶達載體pWX530-rhCEMP1轉入酵母感受態細胞中,酵母經氨基痠營養缺陷型篩選後培養錶達.利用聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳和酶聯免疫吸附測定(ELISA)分析蛋白錶達情況,離子交換層析提純蛋白.結果:構建的重組質粒成功轉入酵母細胞,通過SDS-PAGE和ELISA檢測rhCEMP1錶達成功.結論:成功構建的含rhCEMP1基因的真覈錶達載體pWX530-rhCEMP1,併能轉入酵母細胞中成功錶達.
목적:구건함인중조아골질단백1(recombination human cementum protein 1,rhCEMP1)기인적진핵표체재체,관찰기재양주효모세포중적표체.방법:채용PCR방법확증rhCEMP1기인,이용정향극륭기술장rhCEMP1기인삽입도중간재체pTeasy중,재진일보전삽입재체pWX530.중조적pWX530-rhCEMP1재대장간균DH5α중확증후,통과매절전영감정화DNA서렬측정소구건적질립.경감정정학적표체재체pWX530-rhCEMP1전입효모감수태세포중,효모경안기산영양결함형사선후배양표체.이용취병희선알응효(SDS-PAGE)전영화매련면역흡부측정(ELISA)분석단백표체정황,리자교환층석제순단백.결과:구건적중조질립성공전입효모세포,통과SDS-PAGE화ELISA검측rhCEMP1표체성공.결론:성공구건적함rhCEMP1기인적진핵표체재체pWX530-rhCEMP1,병능전입효모세포중성공표체.
