医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2013年
3期
69-73
,共5页
颜冬梅%郑晓亮%屠凌岚%高明%王孝举
顏鼕梅%鄭曉亮%屠凌嵐%高明%王孝舉
안동매%정효량%도릉람%고명%왕효거
免疫荧光染色%激光扫描共聚焦显微镜%Merm1/Wbscr22
免疫熒光染色%激光掃描共聚焦顯微鏡%Merm1/Wbscr22
면역형광염색%격광소묘공취초현미경%Merm1/Wbscr22
目的 优化细胞免疫荧光染色技术结合激光扫描共聚焦显微镜技术的实验步骤,观察并定位Merm 1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达,以期对后续深入研究Merm1/Wbscr22的分子功能提供技术支持.方法 采用Western blot 及细胞免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察Merm1/Wbscr22在NCI-H1299细胞的表达与定位,改进并优化免疫荧光染色实验步骤.结果 Merml/Wbscr22蛋白在NCI-H1299细胞内过量表达,并定位于细胞核内.细胞免疫染色步骤显著地影响Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色及F-actin、Merm1/Wbscr22、细胞核DNA染色荧光的强度.结论 结合细胞免疫荧光染色技术与激光扫描共聚焦显微镜技术可以清楚地观察Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299的表达与定位,该技术的最优实验步骤是细胞固定、透膜、封闭、Texas Red-鬼笔环肽标记F-actin、一抗结合、二抗结合、DAPI标记细胞核DNA,最后共聚焦显微镜成像,这样既能减少Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色,各组分荧光强度又足够清晰利于观察.
目的 優化細胞免疫熒光染色技術結閤激光掃描共聚焦顯微鏡技術的實驗步驟,觀察併定位Merm 1/Wbscr22在人肺癌細胞NCI-H1299中的錶達,以期對後續深入研究Merm1/Wbscr22的分子功能提供技術支持.方法 採用Western blot 及細胞免疫熒光染色結閤激光掃描共聚焦顯微鏡技術觀察Merm1/Wbscr22在NCI-H1299細胞的錶達與定位,改進併優化免疫熒光染色實驗步驟.結果 Merml/Wbscr22蛋白在NCI-H1299細胞內過量錶達,併定位于細胞覈內.細胞免疫染色步驟顯著地影響Texas Red-鬼筆環肽的非特異性染色及F-actin、Merm1/Wbscr22、細胞覈DNA染色熒光的彊度.結論 結閤細胞免疫熒光染色技術與激光掃描共聚焦顯微鏡技術可以清楚地觀察Merm1/Wbscr22在人肺癌細胞NCI-H1299的錶達與定位,該技術的最優實驗步驟是細胞固定、透膜、封閉、Texas Red-鬼筆環肽標記F-actin、一抗結閤、二抗結閤、DAPI標記細胞覈DNA,最後共聚焦顯微鏡成像,這樣既能減少Texas Red-鬼筆環肽的非特異性染色,各組分熒光彊度又足夠清晰利于觀察.
목적 우화세포면역형광염색기술결합격광소묘공취초현미경기술적실험보취,관찰병정위Merm 1/Wbscr22재인폐암세포NCI-H1299중적표체,이기대후속심입연구Merm1/Wbscr22적분자공능제공기술지지.방법 채용Western blot 급세포면역형광염색결합격광소묘공취초현미경기술관찰Merm1/Wbscr22재NCI-H1299세포적표체여정위,개진병우화면역형광염색실험보취.결과 Merml/Wbscr22단백재NCI-H1299세포내과량표체,병정위우세포핵내.세포면역염색보취현저지영향Texas Red-귀필배태적비특이성염색급F-actin、Merm1/Wbscr22、세포핵DNA염색형광적강도.결론 결합세포면역형광염색기술여격광소묘공취초현미경기술가이청초지관찰Merm1/Wbscr22재인폐암세포NCI-H1299적표체여정위,해기술적최우실험보취시세포고정、투막、봉폐、Texas Red-귀필배태표기F-actin、일항결합、이항결합、DAPI표기세포핵DNA,최후공취초현미경성상,저양기능감소Texas Red-귀필배태적비특이성염색,각조분형광강도우족구청석리우관찰.
