山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
10期
1-3
,共3页
常晶%陆菡%薛庆生%于布为
常晶%陸菡%薛慶生%于佈為
상정%륙함%설경생%우포위
小泛素化相关修饰蛋白%逆转录病毒%神经母细胞瘤细胞
小汎素化相關脩飾蛋白%逆轉錄病毒%神經母細胞瘤細胞
소범소화상관수식단백%역전록병독%신경모세포류세포
目的 构建表达人小泛素化相关修饰蛋白(SUMO)基因的逆转录病毒载体,并观察其稳定感染神经母细胞瘤SHSY5Y细胞后SUMO蛋白的表达情况.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切peDNA 3.0-HA-SUMO1、pcDNA 3.0-HA-SUMO2、pcDNA3.0-HA-SUMO3质粒,得到3×Flag-SUMOs基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化获取逆转录病毒颗粒.将逆转录病毒颗粒感染SHSY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出.Western blot检测稳定转染的pBabe-3 ×Flag-SUMOs-SHSY5Y单克隆细胞SUMO1～3的表达.结果 pBabe-3×Flag-SUMOs-puro质粒构建正确.稳定转染的SHSY5Y细胞系3×Flag-SUMOs表达明显增强.结论 成功构建了稳定表达SUMO的pBabe-3 × Flag-SUMOs-SHSY5Y细胞系.
目的 構建錶達人小汎素化相關脩飾蛋白(SUMO)基因的逆轉錄病毒載體,併觀察其穩定感染神經母細胞瘤SHSY5Y細胞後SUMO蛋白的錶達情況.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切peDNA 3.0-HA-SUMO1、pcDNA 3.0-HA-SUMO2、pcDNA3.0-HA-SUMO3質粒,得到3×Flag-SUMOs基因的編碼序列,定嚮插入到pBabe-puro載體中,經擴增、篩選暘性剋隆、酶切和測序驗證後,轉染293T細胞進行病毒包裝、擴增、純化穫取逆轉錄病毒顆粒.將逆轉錄病毒顆粒感染SHSY5Y細胞,經嘌呤黴素篩選後抗性剋隆集落長齣.Western blot檢測穩定轉染的pBabe-3 ×Flag-SUMOs-SHSY5Y單剋隆細胞SUMO1～3的錶達.結果 pBabe-3×Flag-SUMOs-puro質粒構建正確.穩定轉染的SHSY5Y細胞繫3×Flag-SUMOs錶達明顯增彊.結論 成功構建瞭穩定錶達SUMO的pBabe-3 × Flag-SUMOs-SHSY5Y細胞繫.
목적 구건표체인소범소화상관수식단백(SUMO)기인적역전록병독재체,병관찰기은정감염신경모세포류SHSY5Y세포후SUMO단백적표체정황.방법 용EcoR Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절peDNA 3.0-HA-SUMO1、pcDNA 3.0-HA-SUMO2、pcDNA3.0-HA-SUMO3질립,득도3×Flag-SUMOs기인적편마서렬,정향삽입도pBabe-puro재체중,경확증、사선양성극륭、매절화측서험증후,전염293T세포진행병독포장、확증、순화획취역전록병독과립.장역전록병독과립감염SHSY5Y세포,경표령매소사선후항성극륭집락장출.Western blot검측은정전염적pBabe-3 ×Flag-SUMOs-SHSY5Y단극륭세포SUMO1～3적표체.결과 pBabe-3×Flag-SUMOs-puro질립구건정학.은정전염적SHSY5Y세포계3×Flag-SUMOs표체명현증강.결론 성공구건료은정표체SUMO적pBabe-3 × Flag-SUMOs-SHSY5Y세포계.
