CAJ | 학술논문

背景与目的：Pim家族是具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的原癌基因，包括Pim-1、Pim-2、Pim-3。研究发现，Pim能够抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，导致肿瘤发生。本研究利用ELISA反应原理建立高通量筛选体系，对Pim抑制剂进行筛选，为药物的应用和解决恶性肿瘤临床治疗的难题提供研究基础。方法：通过计算机辅助药物设计的手段，以蔓生百部碱母核三环酰胺作为核心结构合成系列衍生物；利用Pim重组蛋白和Bad重组蛋白可以与Ni2+特异性结合的亲和层析原理进行重组蛋白的纯化精制；利用ELISA方法，通过Pim激酶磷酸化促凋亡蛋白分子Bad在112位丝氨酸的反应，建立筛选Pim靶向抑制剂的体系。结果：0.01 mmol/L的IPTG在37℃条件下，诱导Bad蛋白2 h，可以获得最大量的可溶性Bad重组蛋白；0.02%的阿拉伯糖在37℃条件下，诱导Pim-1、Pim-2、Pim-3蛋白3 h，可以获得最大量的Pim重组蛋白；ELISA结果显示，Pim激酶与Bad底物之间的作用存在剂量依赖性反应关系，进而成功建立药物筛选体系；初步筛选出低分子化合物T-18，在体外能有效抑制Pim激酶活性。结论：利用ELISA反应原理建立的筛选药物方法，是一种经济、简单、快速、高效、敏感的筛选手段，并初步筛选出小分子化合物T-18，能够抑制Pim激酶活性，阻断Pim对凋亡蛋白分子Bad的磷酸化过程，进而抑制肿瘤的发生。
배경여목적：Pim가족시구유사안산/소안산격매활성적원암기인，포괄Pim-1、Pim-2、Pim-3。연구발현，Pim능구억제세포조망，촉진세포증식，도치종류발생。본연구이용ELISA반응원리건립고통량사선체계，대Pim억제제진행사선，위약물적응용화해결악성종류림상치료적난제제공연구기출。방법：통과계산궤보조약물설계적수단，이만생백부감모핵삼배선알작위핵심결구합성계렬연생물；이용Pim중조단백화Bad중조단백가이여Ni2+특이성결합적친화층석원리진행중조단백적순화정제；이용ELISA방법，통과Pim격매린산화촉조망단백분자Bad재112위사안산적반응，건립사선Pim파향억제제적체계。결과：0.01 mmol/L적IPTG재37℃조건하，유도Bad단백2 h，가이획득최대량적가용성Bad중조단백；0.02%적아랍백당재37℃조건하，유도Pim-1、Pim-2、Pim-3단백3 h，가이획득최대량적Pim중조단백；ELISA결과현시，Pim격매여Bad저물지간적작용존재제량의뢰성반응관계，진이성공건립약물사선체계；초보사선출저분자화합물T-18，재체외능유효억제Pim격매활성。결론：이용ELISA반응원리건립적사선약물방법，시일충경제、간단、쾌속、고효、민감적사선수단，병초보사선출소분자화합물T-18，능구억제Pim격매활성，조단Pim대조망단백분자Bad적린산화과정，진이억제종류적발생。
10.3969/j.issn.1007-3969.2013.04.004