CAJ | 학술논문

背景与目的：白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen 14，CD14)为脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)的高亲和受体，能够识别革兰阴性菌、真菌以及结核杆菌并介导机体的炎性反应，为病菌引发多种细胞信号转导的第一步，在肿瘤组织以及癌细胞中常呈异常表达。近来有研究指出，CD14启动子区的功能性突变能够影响CD14的表达，并增加幽门螺杆菌感染后罹患胃癌的风险，据此推测CD14与胃癌的发生、发展密切相关。本研究拟构建CD14-shRNA干扰载体，建立CD14稳定沉默的胃癌细胞系，初步探讨CD14对胃癌细胞侵袭能力的影响，以期为胃癌发病机制的研究奠定实验基础。方法：根据shRNA引物设计原则设计并合成4条CD14-shRNA序列，构建sh-CD14表达载体，转染MGC-803细胞，G418筛选稳转细胞系；RT-PCR检测CD14 mRNA的表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测CD14蛋白的表达；Transwell小室模型检测细胞的侵袭能力。结果：测序结果表明，CD14-shRNA表达载体构建成功并筛选得到了CD14稳定沉默的胃癌细胞系，其CD14 mRNA以及蛋白的表达分别降低了71.7%%和63.4%；与对照组相比CD14-shRNA组细胞侵袭能力显著降低，差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论：成功构建了CD14-shRNA干扰载体并获得了CD14稳定沉默的胃癌细胞系，初步证实CD14的沉默能够影响胃癌细胞的侵袭能力。
배경여목적：백세포분화항원14(cluster of differentiation antigen 14，CD14)위지다당(lipopolysaccharide，LPS)적고친화수체，능구식별혁란음성균、진균이급결핵간균병개도궤체적염성반응，위병균인발다충세포신호전도적제일보，재종류조직이급암세포중상정이상표체。근래유연구지출，CD14계동자구적공능성돌변능구영향CD14적표체，병증가유문라간균감염후리환위암적풍험，거차추측CD14여위암적발생、발전밀절상관。본연구의구건CD14-shRNA간우재체，건립CD14은정침묵적위암세포계，초보탐토CD14대위암세포침습능력적영향，이기위위암발병궤제적연구전정실험기출。방법：근거shRNA인물설계원칙설계병합성4조CD14-shRNA서렬，구건sh-CD14표체재체，전염MGC-803세포，G418사선은전세포계；RT-PCR검측CD14 mRNA적표체；단백질인적법(Western blot)검측CD14단백적표체；Transwell소실모형검측세포적침습능력。결과：측서결과표명，CD14-shRNA표체재체구건성공병사선득도료CD14은정침묵적위암세포계，기CD14 mRNA이급단백적표체분별강저료71.7%%화63.4%；여대조조상비CD14-shRNA조세포침습능력현저강저，차이유현저통계학의의(P<0.01)。결론：성공구건료CD14-shRNA간우재체병획득료CD14은정침묵적위암세포계，초보증실CD14적침묵능구영향위암세포적침습능력。
10.3969/j.issn.1007-3969.2013.04.003