中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2012年
11期
630-637
,共8页
朱圣明%谢玲%郑鸿%秦凤%刘美%骆志国%王艳萍
硃聖明%謝玲%鄭鴻%秦鳳%劉美%駱誌國%王豔萍
주골명%사령%정홍%진봉%류미%락지국%왕염평
α1,3-GT基因%α-半乳糖基%异种抗原%A549细胞
α1,3-GT基因%α-半乳糖基%異種抗原%A549細胞
α1,3-GT기인%α-반유당기%이충항원%A549세포
背景与目的 人体α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3 Galactosyltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不表达α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)表位,但天然存在着大量抗α-gal抗体,异种器官移植研究结果提示,在人肿瘤细胞上重新表达异种移植抗原α-gal,可能诱发类似于宿主抗移植物超急性排斥反应的抗肿瘤效应.本研究通过基因导人手段,建立稳定表达异种移植抗原α-gal的转基因人肺癌细胞系,探讨α-gal介导的人血清抗肿瘤的可能性及其机制方法 将前期成功构建的α-1,3GT基因真核表达质粒pEGFP-N 1-GT瞬时转染人肺腺癌细胞A549,筛选并建立稳定的转基因细胞系A549-GT.MTT增殖实验和显微镜观察转基因细胞生物学特性变化;RT-PCR检测A549-GT中α-1,3GT基因mRNA表达;荧光素标记的凝集素(FITC-BS-IB4 lectin)染色检测α-1,3GT在肿瘤细胞表面合成α-gal的能力;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人细胞共培养,检验α-1,3GT基因的稳定性和酶活性的稳定性;人血清结合实验检测A549-GT与IgM和补体C3结合情况.结果 RT-PCR检测到转基因细胞系A549-GT中有α-1,3GT mRNA表达.荧光显微镜和流式细胞术检测结果显示:A549-GT能够长期稳定表达异种移植抗原α-gal表位;A549-GT与其亲本细胞在生长形态及增殖速度上无明显差异;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人胚肺成纤维细胞MRC-5共培养均不能使MRC-5获得α-gal合成能力;经人血清处理后,荧光免疫实验观察到转基因细胞系A549-GT能与血清抗体IgM结合并诱导补体C3结合.结论 异种移植抗原α-gal在肿瘤细胞上的重新表达,可能通过补体依赖的细胞毒机制,介导类似于异种器官移植排斥反应的抗肿瘤效应.
揹景與目的 人體α-1,3半乳糖基轉移酶(α-1,3 Galactosyltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不錶達α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)錶位,但天然存在著大量抗α-gal抗體,異種器官移植研究結果提示,在人腫瘤細胞上重新錶達異種移植抗原α-gal,可能誘髮類似于宿主抗移植物超急性排斥反應的抗腫瘤效應.本研究通過基因導人手段,建立穩定錶達異種移植抗原α-gal的轉基因人肺癌細胞繫,探討α-gal介導的人血清抗腫瘤的可能性及其機製方法 將前期成功構建的α-1,3GT基因真覈錶達質粒pEGFP-N 1-GT瞬時轉染人肺腺癌細胞A549,篩選併建立穩定的轉基因細胞繫A549-GT.MTT增殖實驗和顯微鏡觀察轉基因細胞生物學特性變化;RT-PCR檢測A549-GT中α-1,3GT基因mRNA錶達;熒光素標記的凝集素(FITC-BS-IB4 lectin)染色檢測α-1,3GT在腫瘤細胞錶麵閤成α-gal的能力;A549-GT細胞及其培養基分彆與正常人細胞共培養,檢驗α-1,3GT基因的穩定性和酶活性的穩定性;人血清結閤實驗檢測A549-GT與IgM和補體C3結閤情況.結果 RT-PCR檢測到轉基因細胞繫A549-GT中有α-1,3GT mRNA錶達.熒光顯微鏡和流式細胞術檢測結果顯示:A549-GT能夠長期穩定錶達異種移植抗原α-gal錶位;A549-GT與其親本細胞在生長形態及增殖速度上無明顯差異;A549-GT細胞及其培養基分彆與正常人胚肺成纖維細胞MRC-5共培養均不能使MRC-5穫得α-gal閤成能力;經人血清處理後,熒光免疫實驗觀察到轉基因細胞繫A549-GT能與血清抗體IgM結閤併誘導補體C3結閤.結論 異種移植抗原α-gal在腫瘤細胞上的重新錶達,可能通過補體依賴的細胞毒機製,介導類似于異種器官移植排斥反應的抗腫瘤效應.
배경여목적 인체α-1,3반유당기전이매(α-1,3 Galactosyltransferase,α-1,3GT)기인공능실활이불표체α-반유당기(α-galactosyl,α-gal)표위,단천연존재착대량항α-gal항체,이충기관이식연구결과제시,재인종류세포상중신표체이충이식항원α-gal,가능유발유사우숙주항이식물초급성배척반응적항종류효응.본연구통과기인도인수단,건립은정표체이충이식항원α-gal적전기인인폐암세포계,탐토α-gal개도적인혈청항종류적가능성급기궤제방법 장전기성공구건적α-1,3GT기인진핵표체질립pEGFP-N 1-GT순시전염인폐선암세포A549,사선병건립은정적전기인세포계A549-GT.MTT증식실험화현미경관찰전기인세포생물학특성변화;RT-PCR검측A549-GT중α-1,3GT기인mRNA표체;형광소표기적응집소(FITC-BS-IB4 lectin)염색검측α-1,3GT재종류세포표면합성α-gal적능력;A549-GT세포급기배양기분별여정상인세포공배양,검험α-1,3GT기인적은정성화매활성적은정성;인혈청결합실험검측A549-GT여IgM화보체C3결합정황.결과 RT-PCR검측도전기인세포계A549-GT중유α-1,3GT mRNA표체.형광현미경화류식세포술검측결과현시:A549-GT능구장기은정표체이충이식항원α-gal표위;A549-GT여기친본세포재생장형태급증식속도상무명현차이;A549-GT세포급기배양기분별여정상인배폐성섬유세포MRC-5공배양균불능사MRC-5획득α-gal합성능력;경인혈청처리후,형광면역실험관찰도전기인세포계A549-GT능여혈청항체IgM결합병유도보체C3결합.결론 이충이식항원α-gal재종류세포상적중신표체,가능통과보체의뢰적세포독궤제,개도유사우이충기관이식배척반응적항종류효응.
