激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2013年
1期
64-68,78
,共6页
黄柏胜%彭志宏%韩仰%舒坤贤%刘发益%邬力祥
黃柏勝%彭誌宏%韓仰%舒坤賢%劉髮益%鄔力祥
황백성%팽지굉%한앙%서곤현%류발익%오력상
甲基转移酶样基因9%慢病毒表达载体%p53基因
甲基轉移酶樣基因9%慢病毒錶達載體%p53基因
갑기전이매양기인9%만병독표체재체%p53기인
目的:克隆大鼠Mettl9基因,并构建慢病毒表达载体,为研究Mettl9基因功能奠定基础.方法:提取原代培养大鼠星形胶质细胞的总RNA,应用RT-PCR方法,扩增出Mettl9 基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体上并测序;再将该基因亚克隆至慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP,测序鉴定,利用脂质体lipofectamine 2000转染至293T细胞进行包装,感染U251细胞,荧光显微镜下观察其表达.结果:Mettl9 cDNA的RT-PCR扩增产物为954 bp的基因片段,连接到pGEM-T载体后测序结果向GenBank递交获得收录号HQ898855;构建的pLenti6.3-Mettl9-IRES-EGFP慢病毒载体在293T细胞完成包装,测得慢病毒滴度达1.825×108 TU/mL;经感染U251细胞,荧光显微镜下可见绿色荧光.结论:成功克隆了SD大鼠Mettl9基因,构建了该基因的慢病毒表达载体pLenti6.3-Mettl9-IRES-EGFP.
目的:剋隆大鼠Mettl9基因,併構建慢病毒錶達載體,為研究Mettl9基因功能奠定基礎.方法:提取原代培養大鼠星形膠質細胞的總RNA,應用RT-PCR方法,擴增齣Mettl9 基因的cDNA,剋隆至pGEM-T載體上併測序;再將該基因亞剋隆至慢病毒載體pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP,測序鑒定,利用脂質體lipofectamine 2000轉染至293T細胞進行包裝,感染U251細胞,熒光顯微鏡下觀察其錶達.結果:Mettl9 cDNA的RT-PCR擴增產物為954 bp的基因片段,連接到pGEM-T載體後測序結果嚮GenBank遞交穫得收錄號HQ898855;構建的pLenti6.3-Mettl9-IRES-EGFP慢病毒載體在293T細胞完成包裝,測得慢病毒滴度達1.825×108 TU/mL;經感染U251細胞,熒光顯微鏡下可見綠色熒光.結論:成功剋隆瞭SD大鼠Mettl9基因,構建瞭該基因的慢病毒錶達載體pLenti6.3-Mettl9-IRES-EGFP.
목적:극륭대서Mettl9기인,병구건만병독표체재체,위연구Mettl9기인공능전정기출.방법:제취원대배양대서성형효질세포적총RNA,응용RT-PCR방법,확증출Mettl9 기인적cDNA,극륭지pGEM-T재체상병측서;재장해기인아극륭지만병독재체pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP,측서감정,이용지질체lipofectamine 2000전염지293T세포진행포장,감염U251세포,형광현미경하관찰기표체.결과:Mettl9 cDNA적RT-PCR확증산물위954 bp적기인편단,련접도pGEM-T재체후측서결과향GenBank체교획득수록호HQ898855;구건적pLenti6.3-Mettl9-IRES-EGFP만병독재체재293T세포완성포장,측득만병독적도체1.825×108 TU/mL;경감염U251세포,형광현미경하가견록색형광.결론:성공극륭료SD대서Mettl9기인,구건료해기인적만병독표체재체pLenti6.3-Mettl9-IRES-EGFP.
