中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
3期
242-247
,共6页
郑夔%丁国允%周惠琼%谢雪妹%李小波%师永霞%苏锦坤%黄吉城
鄭夔%丁國允%週惠瓊%謝雪妹%李小波%師永霞%囌錦坤%黃吉城
정기%정국윤%주혜경%사설매%리소파%사영하%소금곤%황길성
登革病毒%基孔肯雅病毒%内参%多重实时荧光RT-PCR
登革病毒%基孔肯雅病毒%內參%多重實時熒光RT-PCR
등혁병독%기공긍아병독%내삼%다중실시형광RT-PCR
目的 建立一种登革病毒、基孔肯雅病毒并含人类基因内参检测的多重实时荧光RT-PCR方法,能在同一反应管内同时检测目前发现的所有来源的登革病毒或基孔肯雅病毒.方法 针对登革病毒3′端非编码区和基孔肯雅病毒结构蛋白E2-6K-E1区以及人体各类组织细胞中均能稳定表达的RNAse P基因,设计了3套特异性引物和探针,建立了1套能同时检测登革病毒、基孔肯雅病毒及含有人类基因检测内参的多重实时荧光RT-PCR方法,对其灵敏性和特异性进行了验证,并对临床发热病人标本进行了应用评估.结果 该方法对检测体外转录合成的登革病毒和基孔肯雅病毒RNA的灵敏性可达最低每个反应10～100拷贝,对检测登革1型病毒和基孔肯雅病毒的灵敏性分别可达最低每个反应0.1 TCID50/mL和1 TCID50/mL.用20株登革病毒、4株基孔肯雅病毒和日本脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、盖塔病毒、辛德毕斯病毒各1株进行检测,方法的特异性均为100%.方法应用于189份发热病人血清标本检测,可准确地鉴定出其中登革病毒或基孔肯雅病毒核酸阳性的标本,且所有血清标本均能被内参引物和探针有效地扩增和杂交.结论 本研究建立了一种高灵敏性、高特异性且含人类基因内参检测的登革病毒和基孔肯雅病毒多重实时荧光RT-PCR检测方法,可作为登革热或基孔肯雅热病人早期快速鉴别诊断的有效工具,也可用于蚊媒携带登革病毒或基孔肯雅病毒的高通量快速筛查.
目的 建立一種登革病毒、基孔肯雅病毒併含人類基因內參檢測的多重實時熒光RT-PCR方法,能在同一反應管內同時檢測目前髮現的所有來源的登革病毒或基孔肯雅病毒.方法 針對登革病毒3′耑非編碼區和基孔肯雅病毒結構蛋白E2-6K-E1區以及人體各類組織細胞中均能穩定錶達的RNAse P基因,設計瞭3套特異性引物和探針,建立瞭1套能同時檢測登革病毒、基孔肯雅病毒及含有人類基因檢測內參的多重實時熒光RT-PCR方法,對其靈敏性和特異性進行瞭驗證,併對臨床髮熱病人標本進行瞭應用評估.結果 該方法對檢測體外轉錄閤成的登革病毒和基孔肯雅病毒RNA的靈敏性可達最低每箇反應10～100拷貝,對檢測登革1型病毒和基孔肯雅病毒的靈敏性分彆可達最低每箇反應0.1 TCID50/mL和1 TCID50/mL.用20株登革病毒、4株基孔肯雅病毒和日本腦炎病毒、西尼囉病毒、黃熱病毒、蓋塔病毒、辛德畢斯病毒各1株進行檢測,方法的特異性均為100%.方法應用于189份髮熱病人血清標本檢測,可準確地鑒定齣其中登革病毒或基孔肯雅病毒覈痠暘性的標本,且所有血清標本均能被內參引物和探針有效地擴增和雜交.結論 本研究建立瞭一種高靈敏性、高特異性且含人類基因內參檢測的登革病毒和基孔肯雅病毒多重實時熒光RT-PCR檢測方法,可作為登革熱或基孔肯雅熱病人早期快速鑒彆診斷的有效工具,也可用于蚊媒攜帶登革病毒或基孔肯雅病毒的高通量快速篩查.
목적 건립일충등혁병독、기공긍아병독병함인류기인내삼검측적다중실시형광RT-PCR방법,능재동일반응관내동시검측목전발현적소유래원적등혁병독혹기공긍아병독.방법 침대등혁병독3′단비편마구화기공긍아병독결구단백E2-6K-E1구이급인체각류조직세포중균능은정표체적RNAse P기인,설계료3투특이성인물화탐침,건립료1투능동시검측등혁병독、기공긍아병독급함유인류기인검측내삼적다중실시형광RT-PCR방법,대기령민성화특이성진행료험증,병대림상발열병인표본진행료응용평고.결과 해방법대검측체외전록합성적등혁병독화기공긍아병독RNA적령민성가체최저매개반응10～100고패,대검측등혁1형병독화기공긍아병독적령민성분별가체최저매개반응0.1 TCID50/mL화1 TCID50/mL.용20주등혁병독、4주기공긍아병독화일본뇌염병독、서니라병독、황열병독、개탑병독、신덕필사병독각1주진행검측,방법적특이성균위100%.방법응용우189빈발열병인혈청표본검측,가준학지감정출기중등혁병독혹기공긍아병독핵산양성적표본,차소유혈청표본균능피내삼인물화탐침유효지확증화잡교.결론 본연구건립료일충고령민성、고특이성차함인류기인내삼검측적등혁병독화기공긍아병독다중실시형광RT-PCR검측방법,가작위등혁열혹기공긍아열병인조기쾌속감별진단적유효공구,야가용우문매휴대등혁병독혹기공긍아병독적고통량쾌속사사.
