中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
3期
211-215
,共5页
王素凡%齐辰%陈滨%吴焜%陈晓光
王素凡%齊辰%陳濱%吳焜%陳曉光
왕소범%제신%진빈%오혼%진효광
刚地弓形虫%棒状体蛋白18%基因克隆%原核表达%免疫分析
剛地弓形蟲%棒狀體蛋白18%基因剋隆%原覈錶達%免疫分析
강지궁형충%봉상체단백18%기인극륭%원핵표체%면역분석
目的 克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析.方法 提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western-blot检测.结果 PCR得到约1 665 bp目的 基因片段,单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;经IPTG诱导后,ROP18基因在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,pET28a-ROP18在相对分子质量约60 kD的位置出现目的 蛋白条带,pET32a-ROP18在相对分子质量约83 kD的位置出现目的 蛋白条带,均与理论值相符;Western-blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性.结论 成功克隆和表达了ROP18基因,所表达的重组蛋白具有免疫效应,为其功能研究奠定基础.
目的 剋隆剛地弓形蟲ROP18基因,進行原覈錶達及重組蛋白的免疫分析.方法 提取弓形蟲RH株基因組DNA,經PCR穫得ROP18基因片段,經雙酶切分彆連入原覈錶達載體pET-28a(+)和pET-32a(+),構建重組錶達載體pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,併轉化大腸桿菌BL21(DE3).IPTG誘導錶達後,收集菌體進行SDS-PAGE電泳及Western-blot檢測.結果 PCR得到約1 665 bp目的 基因片段,單、雙酶切及PCR鑒定結果顯示成功構建重組錶達載體pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;經IPTG誘導後,ROP18基因在大腸桿菌中高效錶達;SDS-PAGE電泳及Western-blot分析顯示,pET28a-ROP18在相對分子質量約60 kD的位置齣現目的 蛋白條帶,pET32a-ROP18在相對分子質量約83 kD的位置齣現目的 蛋白條帶,均與理論值相符;Western-blot結果顯示重組蛋白與弓形蟲慢性感染小鼠血清具有特異免疫反應性.結論 成功剋隆和錶達瞭ROP18基因,所錶達的重組蛋白具有免疫效應,為其功能研究奠定基礎.
목적 극륭강지궁형충ROP18기인,진행원핵표체급중조단백적면역분석.방법 제취궁형충RH주기인조DNA,경PCR획득ROP18기인편단,경쌍매절분별련입원핵표체재체pET-28a(+)화pET-32a(+),구건중조표체재체pET28a-ROP18화pET32a-ROP18,병전화대장간균BL21(DE3).IPTG유도표체후,수집균체진행SDS-PAGE전영급Western-blot검측.결과 PCR득도약1 665 bp목적 기인편단,단、쌍매절급PCR감정결과현시성공구건중조표체재체pET28a-ROP18화pET32a-ROP18;경IPTG유도후,ROP18기인재대장간균중고효표체;SDS-PAGE전영급Western-blot분석현시,pET28a-ROP18재상대분자질량약60 kD적위치출현목적 단백조대,pET32a-ROP18재상대분자질량약83 kD적위치출현목적 단백조대,균여이론치상부;Western-blot결과현시중조단백여궁형충만성감염소서혈청구유특이면역반응성.결론 성공극륭화표체료ROP18기인,소표체적중조단백구유면역효응,위기공능연구전정기출.
